[发明专利]狂犬病街毒株HN10全基因组序列及其制备方法和用途无效
| 申请号： | 200910077116.4 | 申请日： | 2009-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN101463355A | 公开（公告）日： | 2009-06-24 |
| 发明（设计）人： | 唐青;李浩 | 申请（专利权）人： | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 |
| 主分类号： | C12N15/47 | 分类号： | C12N15/47;C12N15/11;C12N15/10;C12N15/86 |
| 代理公司： | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 | 代理人： | 程凤儒 |
| 地址： | 100052北京市宣武区迎新街100*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 狂犬病 街毒株 hn10 基因组 序列 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种狂犬病街毒株HN10全基因组序列扩增引物，其特征在于，所述全基因组序列如SEQ ID No.1所示，所述扩增引物如SEQ ID No.2至SEQ ID No.49所示，共24个引物对。
2.一种制备狂犬病街毒株HN10全基因组序列的方法，其特征在于，引物合成如SEQ ID No.2至SEQ ID No.49所示，针对所示引物将病毒基因组序列分为24段；利用SEQ ID No.2至SEQ ID No.49所示引物分别对分段基因序列进行目的基因的PCR扩增；目的基因片段的回收，测序；对所测定的序列利用生物软件对各段序列重叠部分的比对作用进行序列拼接，将24个片段首尾相接，最终得到狂犬病街毒株HN10全基因组序列，如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求2所述的一种制备狂犬病街毒株HN10全基因组序列的方法，其特征在于，所述病毒基因组序列分段为：根据SEQ ID No.2至SEQ ID No.49所示引物将病毒逆转录产物cDNA分为24个片段，每片段不超过1.1kb。
4.根据权利要求2所述的一种制备狂犬病街毒株HN10全基因组序列的方法，其特征在于，所述步骤PCR扩增反应体系为：H2O 34.5ul，10×Pfx扩增缓冲液5ul，10mM dNTP mix 1.5ul，50mM MgSO4 1ul，正向引物F 1ul，反向引物R 1ul，cDNA 5ul，Pfx DNA聚合酶1ul；
PCR循环条件参数：先用94℃2min进行一个循环，然后用94℃ 15sec；50℃ 30sec；68℃ 40sec进行35个循环，最后再进行一个68℃ 10min的延伸。
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