[发明专利]一种牛传染性鼻气管炎疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛传染性鼻气管炎疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。 

发明背景 

牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis virus，IBRV)引起牛发生的一种急性、热性、接触性传染病，以高热、呼吸困难、鼻炎、窦炎和上呼吸道炎症为特征。还可引起母牛生殖系统损害、出现流产和死胎，以及发生肠炎和小牛脑炎，有时发生眼结膜炎和角膜炎，对奶牛的产奶量、公牛的繁殖力及使役牛的使役力均有较大的影响，而且急性的IBR呼吸道感染可继发牛致命性细菌性肺炎，是造成养牛业经济损失的主要原因之一。 

近年来随着奶牛数量的迅速增长，牛群中流产病例增多，而且有些病例布鲁氏菌病检查为阴性，有的还出现生殖器疱疹。这些症状提示牛群中存在IBR，牛群中假如存在IBR的潜伏感染，则很难将其根除，将对养牛业造成极大的危害。一旦感染IBRV，病毒可潜伏于三叉神经节或荐神经节造成潜伏感染或散毒，病牛可终身带毒，给本病的防治带来很大的困难。 

由于畜牧业的集约化发展和人们生活水平的提高，我国养牛业的规模不断扩大，牛的数量也迅猛增加，但由于某些重大传染病不能根治，如牛呼吸道病毒群，包括牛疱疹病毒-I型(BHV-1)、牛副流感病毒(BPIV3)、牛呼吸道综合症病毒(BRSV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等，其流行和危害有增无减，给养牛业造成巨大的经济损失。另外，世界贸易组织对进出口的牛及其制品具有严格地检疫政策，以控制牛病的发生和流行。我国的动植物检疫法中也明确规定，凡进出口的牛及制品必须进行IBRV的检测。因此，尽快启动牛的重大疾病的根除和控制计划势在必行，用疫苗免疫接种是预防和控制的重要措施。 

美国及欧洲很多国家通过疫苗免疫接种，对牛传染性鼻气管炎的流行起到很好的控制作用，但也存在免疫效果差、抗体阳性率低及活疫苗散毒等问题。我国在这方面的研究比较落后，未见疫苗研制成功报告。本发明通过无菌采集IBR流产胎牛的肝、脾、心、肾、胎盘、肺病料，接种犊牛睾丸细胞进行病毒分离，并且对所分离病毒进行血清学、分子生物学以及理化特性鉴定，确定为牛传染性鼻气管炎病毒，并将其制成油乳剂灭活疫苗，临床试验结果证明，2头份剂量即可使免疫牛抗体阳性率达到100％，具有良好的免疫效果，且灭活疫苗不存在散毒的危险，可以用来预防控制牛传染性鼻气管炎地方性流行，具有重要的应用价值，填补了我国该方面研究的空白。同时，本发明也为牛传染性鼻气管炎基因工程疫苗的应用研究奠定了基础。 

发明内容

本发明的目的是提供一种牛传染性鼻气管炎疫苗及其制备方法，用于解决牛传染性鼻气管炎地区性流行的疫苗预防控制问题。 

本发明是通过以下技术方案实现的： 

一种牛传染性鼻气管炎疫苗，其特征在于所述病毒为牛传染性鼻气管炎病毒，Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus，简称IBRV，系从牛传染性鼻气管炎流行地区分离鉴定。 

上述牛传染性鼻气管炎疫苗，所述牛传染性鼻气管炎病毒对乙醚、氯仿和胰蛋白酶敏感；不耐酸碱，用0.1mol/L NaOH和0.1mol/L HCl溶液将病毒液分别调到pH3，pH9和pH11，37℃作用1h，即可将病毒灭活；可被IBRV阳性血清中和，中和抗体滴度为2^-7.9；TCID₅₀值为10^-6.65/100μl，10^-3.35/20μl。 

上述牛传染性鼻气管炎疫苗，所述牛传染性鼻气管炎病毒可以用IBRV特异性引物经PCR扩增出339bp的gB基因的高保守区序列，所述的IBRV特异性引物序列为： 

PB1：5′-GGC TCT ACC GCA CGG GCA CCT CT-3′； 

PB2：5′-GCG GCT CTC GTC TCG CAG CAT TT-3′。 

一种牛传染性鼻气管炎疫苗制备方法，制备方法包含如下步骤：