[发明专利]一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法和含量测定方法

权利要求书

1.一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法，其中包括以下步骤：

(1)以祖师麻药材为原料，水或C₁～C₅低级醇水溶液为溶剂进行提取，制得浸膏；

(2)将浸膏与固体稀释剂混合，加入有机溶剂进行提取，回收溶剂得到固体提取物，或者将浸膏加水悬浮，加入有机溶剂萃取，回收溶剂得到固体提取物；

(3)将固体提取物加水悬浮，采用大孔吸附树脂层析，首先以水或C₁～C₅低级醇水溶液为流动相淋洗除杂质，然后以C₁～C₅低级醇水溶液洗脱，收集洗脱液；

(4)前半部分洗脱液回收溶剂得到固体，即一部分祖师麻总香豆素提取物；后半部分洗脱液回收溶剂得到的固体加水混悬，再用有机溶剂萃取，有机层回收溶剂得到固体，即另一部分祖师麻总香豆素提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取的方法为回流或渗漉。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中C₁～C₅低级醇水溶液的低级醇浓度为0～95％(体积/体积)，优选为30～70％(体积/体积)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中有机溶剂为醋酸乙酯、正丁醇和/或水饱和正丁醇。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)为将浸膏与固体稀释剂混合，加入有机溶剂进行提取，回收溶剂得到固体提取物。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中固体稀释剂选自淀粉、微粉硅胶、硅藻土、高岭土、活性炭和白陶土中的一种或多种。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中大孔吸附树脂选自苯乙烯、苯乙烯-丙烯酸酯、二苯乙烯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯型树脂中的一种或多种，例如D101、D201、HPD300、HPD400、HPD800、FL-1、FL-2和/或AB-8树脂，优选为苯乙烯型或苯乙烯-丙烯酸酯型大孔吸附树脂。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中淋洗除杂质使用的低级醇水溶液的低级醇浓度为0～50％(体积/体积)，优选为0～20％(体积/体积)。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中洗脱树脂使用的低级醇水溶液的低级醇浓度为20～90％(体积/体积)，优选为20～50％(体积/体积)。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)后半部分洗脱液萃取采用的有机溶剂为醋酸乙酯和/或正丁醇。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的制备方法制备的祖师麻总香豆素提取物。

12.根据权利要求11所述的祖师麻总香豆素提取物，其特征在于，按提取物总重量计，所述总香豆素的含量不低于50％(重量)，例如50％～90％(重量)。

13.根据权利要求11或12所述的祖师麻总香豆素提取物，其特征在于，所述总香豆素提取物包含瑞香素、祖师麻乙素、瑞香素-8-O-葡萄糖苷和7-OH-香豆素中的一种或多种。

14.根据权利要求13所述的祖师麻总香豆素提取物，其特征在于，按提取物总重量计，所述总香豆素提取物包含瑞香素0％～50％(重量)，祖师麻乙素0％～50％(重量)，瑞香素-8-O-葡萄糖苷0％～50％(重量)，7-OH-香豆素0％～30％(重量)。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的祖师麻总香豆素提取物的含量测定方法，其中包括以下步骤：

(1)瑞香素、祖师麻乙素、瑞香素-8-O-葡萄糖苷及7-OH-香豆素的HPLC含量测定：

精密称取祖师麻总香豆素提取物50mg，置于50mL量瓶中，加50％(体积/体积)甲醇水溶液适量使其溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2mL置于10mL量瓶中，加50％(体积/体积)甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别以瑞香素、祖师麻乙素、瑞香素-8-O-葡萄糖苷及7-OH-香豆素的甲醇溶液为对照品溶液；色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，体积比为25∶75的甲醇-0.5％醋酸水溶液为流动相；检测波长为327nm；

(2)祖师麻总香豆素的含量测定：

分别将上述供试品溶液及祖师麻乙素对照品溶液稀释至适当体积，按照紫外-可见分光光度法，在310nm波长处测定吸收度，计算。