[发明专利]血吸虫病快速测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.血吸虫病快速测定试剂盒，包括底板(1)，其特征在于，还包括硝酸纤 维素膜(2)、胶体金结合垫(3)、样品垫(4)和吸水垫(5)；

所述血吸虫病快速测定试剂盒的制备方法包括如下步骤：

(1)样品垫的制备：以含有浓度为0.5mg/ml-1mg/ml的抗人红细胞抗体或 植物凝集素缓冲溶液均匀处理玻璃纤维膜或纺布包被载体，包被方式采取用移 液器将包被溶液均匀的铺到样品垫中或采取将样品垫置于包被溶液中浸泡均 匀，处理好的包被材料采用冷冻干燥、真空干燥或加热干燥的方式处理，再按 照规格裁切成适当大小的长条后备用；

(2)制备胶体金溶液：胶体金结合垫的材料采用玻璃纤维膜、无纺布或聚 酯膜作为包被载体，采用柠檬酸三钠还原法制备纳米胶体金溶液，在洁净的圆 底烧瓶中加入1L纯化水，加热并搅拌，取1％的氯金酸溶液10ml于圆底烧瓶中， 待溶液沸腾时，快速加入1％的柠檬酸三钠溶液10ml，继续搅拌溶液并反应5-10 分钟，溶液中的氯金酸逐渐被还原成金颗粒，溶液由无色到黑色，最后变成酒 红色，停止加热将溶液冷却至室温后2-8℃保存备用；

(3)胶体金标记最佳pH和最佳标记蛋白量：胶体金标记SPA的pH为6.0， 胶体金标记SPA的标记蛋白量为10ug；胶体金标记鼠抗人IgG的pH为7.5，体 金标记鼠抗人IgG的标记蛋白量为10ug；

胶体金溶液中加入最佳标记蛋白量的捕获抗体，捕获抗体为鼠抗人IgG或 SPA蛋白，搅拌10-30分钟后，按照每100ml溶液10ml的比例加入10％的牛血 清白蛋白或按照每100ml溶液10ml的比例加入1％的聚乙二醇，混匀后 8000-12000转/分离心30分钟，弃上清，红色沉淀按照每100ml胶体金10ml的 比例，用含有1％牛血清白蛋白、0.1％聚乙二醇、pH＝8.2的PBS溶液悬浮；

(4)胶体金结合垫的制备：将上述步骤得到的胶体金蛋白复合物均匀的铺 在结合垫上，将包被好的胶体金结合垫采用冷冻干燥、真空干燥或加热干燥的 方式处理，再按照规格裁切成适当大小的长条备用；

(5)硝酸纤维素膜的包被：将血吸虫虫卵抗原研磨后，用0.85％的生理盐 水溶液，置于-20℃冷冻过夜，白天溶解，如此反复冻融5-10次，将溶液置于碎 冰块中，用超声波破碎3分钟，反复破碎10次，12000转/分高速离心30分钟， 取上清液即为血吸虫虫卵抗原；

将1mg/ml的血吸虫虫卵抗原吸入到检测线注射泵中，1mg/ml的抗人IgG吸 入到质控线注射泵中，用包被机按照0.5-1μl/cm的包被速度，将血吸虫虫卵抗 原和抗人IgG包被到硝酸纤维素膜适当的位置，于37℃过夜干燥后备用；

(6)血吸虫病快速测定试剂盒的制备：将吸水垫(5)及按照上述步骤制 备好的硝酸纤维素膜(2)、胶体金结合垫(3)和样品垫(4)水平方向顺序相 接并粘贴到底板(1)上，在胶体金结合垫(3)上粘贴箭头标签层(7)，在吸 水垫(5)上方粘贴产品标签层(6)，切条宽度为3mm，得到半成品，将一人份 半成品和一人份干燥剂装入铝塑袋中，再将铝塑袋开口端热封即可。

2.根据权利要求1所述的血吸虫病快速测定试剂盒，其特征在于，所述硝 酸纤维素膜采用尼龙膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜替代。