[发明专利]适用于多种样品的快速免疫层析试剂条测试法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫层析方法，特别是涉及一种不采用玻璃纤维膜和固态显色剂的、适用于多种样品的快速免疫层析试剂条测试法。

背景技术

胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，由Beggs等最先用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测定。GICA是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体，利用微孔膜的毛细管作用，使滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，如同层析一般。免疫金复合物干片粘连在近NC膜条下端(c)，膜条测试区(t)包有特异抗体，当试纸条下端进入液体标本样中，下端吸水材料吸取液体向上端移动，流经c处时，使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移，若标本有特异性抗原时，可与免疫金复合物的抗体结合，形成的金标抗原-抗体复合物流至测试区，被固相抗体所捕获，形成抗体-抗原-金标抗体复合物，在膜上t处出现红色控制线。

传统的免疫层析试剂条主要由底板、硝酸纤维膜、吸水纸和玻璃纤维膜和固态显色剂组成，而且由于采用固态显色剂，因此需要干燥工艺，且对于显色剂的储存有一定要求，如必须储存于密封性良好的铝箔袋中，一旦打开受潮即丧失功效。

而且，现有的免疫层析试剂条在测试不同样品的时候，由于样品处理的方式不同，需要采用不同的试剂条。如在测试全血样品时，需要在样品垫上加上诸如抗RBC(红细胞)抗体或一些化学物质来起到凝集或过滤红细胞的作用，以免全血样品中的红细胞在反应或质控区域显色而造成假样品等影响测试结果的现象。因此，传统的免疫层析试剂条测试法具有成本高、同一产品样品适用范围不广等缺点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种适用于多种样品的快速免疫层析试剂条测试法，通过采用由粘性底板、多孔纤维材料和吸水材料组成的试剂条及液态的显色剂，使本发明与传统法相比，具有成本低、样品适用范围扩大等特点，同时又不失去传统法的灵敏度。

为解决上述技术问题，本发明的一种适用于多种样品的快速免疫层析试剂条测试法，包括步骤：

1)按常规方法制备试剂条

该试剂条由粘性底板、多孔纤维材料和吸水材料组成，多孔纤维材料上按层析方向依次设有测试区和质控区，测试区上固定有与检测项相对应的反应试剂，质控区固定有与显色剂相对应的质控试剂；

2)将待测样品与处理液混合，形成测试样品混合物，待测样品与处理液的混合体积比范围为1∶1～1∶100，其中，处理液是含体积百分数为0.1％～3％表面活性剂的缓冲液，其缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、磷酸缓冲液，缓冲液浓度范围在0.001mol/L～1mol/L，缓冲液pH值范围为4.0～10.5，表面活性剂包括吐温-20、聚乙烯醇和聚乙二醇；

3)按照常规方法制备显色剂，并将相应试剂与显色剂混合，形成显色剂混合物，其中，显色剂混合物中含有的相应试剂的浓度为0.001mg/ml～100mg/ml；

4)将测试样品混合物和显色剂混合物分别置于两个微孔容器中；

5)将多孔纤维材料一端浸于测试样品混合物的液面之下，液面位置不超过试剂条上固定有反应试剂的测试区位置，样品通过毛细作用会向吸水材料一端爬升；

6)待样品爬升至吸水材料，取出试剂条，将多孔纤维材料一端重新浸于显色剂混合物液面之下，液面位置不超过试剂条上固定有反应试剂的测试区位置，显色剂混合物同样会通过毛细作用向吸水材料一端爬升，于判读时间段内，判读测试结果。

所述步骤1)中的多孔纤维材料包括硝酸纤维膜，其孔径范围在0.02～15μm；吸水材料包括吸水纸；反应试剂是与检测项相对应、且能发生特异反应的试剂，包括蛋白、抗原或抗体，浓度范围为0.001mg/ml～100mg/ml；质控试剂是与显色剂相对应的试剂，包括蛋白、抗原或抗体，浓度为0.001mg/ml～100mg/ml。

所述步骤3)中的显色剂是液体状态的显色剂，包括胶体金、乳胶和荧光；相应试剂是与待测样品相应的试剂，包括蛋白、抗体或抗原。

所述步骤6)中的判断时间段范围为2～15分钟。

综上所述，本发明与传统的试剂条层析法相比较，具有以下优点：

1)无需玻璃纤维膜，从而节约成本；

2)以液态显色剂取代传统方法中的固态显色剂，避免了传统方法中所需的干燥工艺，生产工艺更为简单，容易控制，且液态的显色剂具有方便贮存(无需铝箔袋，干燥剂密封保存)，有效期长(两年以上)等特点；