[发明专利]一种解除铵阻遏的生物产氢基因工程菌及其构建方法

权利要求书

1.一种解除铵阻遏的生物产氢基因工程菌，其不表达谷氨酰胺合成酶。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌的基因组中，含有突变的glnA基因序列，其不编码谷氨酰胺合成酶。

3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌是紫色非硫细菌。

4.如权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述的紫色非硫细菌选自：类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、荚膜红细菌(Rhodobacter capsulutas)、深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)。

5.一种制备权利要求1所述的基因工程菌的方法，包括：

(1)提供一打靶质粒，所述的打靶质粒中，含有突变的glnA基因序列，其不编码谷氨酰胺合成酶；

(2)将(1)所述的打靶质粒转入紫色非硫细菌内，通过同源交换使得突变的glnA基因序列整合到紫色非硫细菌的基因组；和

(3)选择发生了双交换的紫色非硫细菌，即为权利要求1所述的基因工程菌。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，通过接合转移的方法将打靶质粒转入紫色非硫细菌内。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述选择发生了双交换的紫色非硫细菌的方法是：

(a)将待选择的菌涂布到添加筛选培养基上，所述的培养基为RCVBN，其中以1.0-1.6g/L谷氨酰胺代替其中的硫酸铵；

(b)培养所述的菌，能够在培养基上生长的菌即为发生了双交换的紫色非硫细菌。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的筛选培养基含有：DL苹果酸4g/L，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾缓冲液10mM，七水硫酸镁200mg/L，谷氨酰胺1.45g/L，二水氯化钙75mg/L，乙二胺四乙酸钠20mg/L，生物素0.01mg/L，维生素B10.5mg/L，尼克酸1mg/L，微量金属元素贮液1mL/L，琼脂粉20g/L。

9.一种利用高氨离子浓度的底物制备氢气的方法，包括：在光照下，培养权利要求1所述的基因工程菌，收集所产生的氢气。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，

光照强度为5000±2000lux；或

培养时，采用的底物选自：RCVBN培养基、生物乙醇废水，琥珀酸厂废水，豆制品废水；或

底物中铵离子浓度为0-100mM。