[发明专利]一种利用酿酒酵母表达北非蝎毒素的方法无效
| 申请号： | 200910055997.X | 申请日： | 2009-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN101649327A | 公开（公告）日： | 2010-02-17 |
| 发明（设计）人： | 黄晶心;付盈盈;肖明 | 申请（专利权）人： | 上海师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12P21/02;C12R1/865 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人： | 谢文凯;黄志达 |
| 地址： | 20023*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 酿酒 酵母 表达 北非 毒素 方法 | ||
1、一种利用酵母菌表达北非蝎毒素的方法，依次包括如下步骤：
a)提供北非蝎毒素基因AaHIT1；
b)构建酵母细胞中表达AaHIT1蛋白的重组质粒pYES2/AaHIT1；
c)将重组质粒pYES2/AaHIT1转化酵母菌细胞；
d)筛选获得转化菌株AINVSC1并鉴定；
e)培养转化菌株AINVSC1，表达北非蝎毒素蛋白。
2、根据权利要求1所述的利用酵母菌表达北非蝎毒素的方法，其特征在于，所述的重组质粒pYES2/AaHIT1含有GAL1启动子。
3、根据权利要求1所述的利用酵母菌表达北非蝎毒素的方法，其特征在于，所述的步骤e)中AINVSC1菌株的培养温度为20℃-37℃。
4、根据权利要求3所述的利用酵母菌表达北非蝎毒素的方法，其特征在于，所述的步骤e)中AINVSC1菌株的培养温度为28℃。
5、根据权利要求1所述的利用酵母菌表达北非蝎毒素的方法，其特征在于，所述的步骤e)中AINVSC1菌株的培养时间为14-28小时。
6、根据权利要求1所述的利用酵母菌表达北非蝎毒素的方法，其特征在于，所述的步骤e)中AINVSC1菌株的培养时间为20小时。
7、一种北非蝎毒素，采用酿酒酵母菌表达，其制备方法依次包括如下步骤：
a)提供北非蝎毒素基因AaHIT1；
b)构建酵母细胞中表达AaHIT1蛋白的重组质粒pYES2/AaHIT1；
c)将重组质粒pYES2/AaHIT1转化酵母菌细胞；
d)筛选获得转化菌株AINVSC1并鉴定；
e)培养转化菌株AINVSC1，表达北非蝎毒素蛋白。
8、根据权利要求7所述的北非蝎毒素，其特征在于，所述的步骤e)中AINVSC1菌株的培养温度为20℃-37℃。
9、根据权利要求8所述的北非蝎毒素，其特征在于，所述的步骤e)中AINVSC1菌株的培养温度为28℃。
10、根据权利要求8或9所述的北非蝎毒素，其特征在于，所述的北非蝎毒素蛋白存在于培养酵母菌AINVSC1的菌液上清。
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