[发明专利]一种人脐带间充质干细胞库的构建方法

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞库的构建方法，由下述步骤组成：

(1)取人脐带进行ABO/Rh血型检测、HLA分型检测、微生物免疫检测、 用缓冲液冲洗去除残留血液，剪碎，获得人脐带组织；

(2)向步骤(1)所获得人脐带组织中加入1-3倍体积的0.05％-0.2％胶

原酶消化，所述胶原酶消化温度为37℃，消化时间为2h，并获得消化后组

织；

(3)加入缓冲液稀释步骤(2)消化后组织，混匀、离心，离心力为600g， 时间为15分钟；

(4)弃上清，加入缓冲液重悬步骤(3)沉淀，过200目筛网，收集滤液， 离心，离心力为450g，时间为10分钟，重复两次，即获得人脐带间充质干 细胞；

(5)将步骤(4)得到的人脐带间充质干细胞按2×10⁴/cm²接种于塑料 培养皿，用含10％FBS的LG-DMEM培养基，置37℃、5％CO₂培养箱培养， 2天后换液，弃去非贴壁细胞，以后每3天后换液，待细胞80％汇合，0.25％ 胰酶消化，按1∶3传代，扩增后得到大量间充质干细胞，并用冷冻保护剂预 处理，分装放入冻存管，所述冷冻保护剂由10％DMSO、10％右旋糖苷和 80％LG-DMEM组成。

(6)将步骤(5)获得的人脐带间充质干细胞置液氮保存，按其ABO/Rh 分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出人脐 带间充质干细胞库。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸缓 冲液。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液pH 值为7.2-7.4。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述胶原酶消化的同 时，通过用转子进行搅拌来提高消化程度。