[发明专利]一种检测囊型包虫病的免疫层析试条及其制备方法

权利要求书

1.一种用于免疫学方法检测囊型包虫病的试剂，包括以下组分：

(1)囊型包虫病的天然抗原；(2)抗人IgG的标记抗体；

所述的囊型包虫病天然抗原按如下方法制备：取新鲜羊肝包囊液，以3000r/min离心20min，吸上清液入透析袋，用PBS溶液于4℃下透析过夜，将透析过夜的包囊液6000r/min离心20min，取上清，弃沉淀，即制得囊型包虫病天然抗原；

所述的抗人IgG的标记抗体是利用人IgG免疫鼠、兔、羊或者其他动物获得的多抗或单克隆抗体，所说的标记包括酶标记、胶体金标记或者其他标记。

2.根据权利要求1的检测包虫病的试剂，其特征在于，其中所述的标记抗体是鼠抗人IgG的单克隆抗体。

3.根据权利要求1的检测囊型包虫病的试剂，其特征在于，其中所述的标记抗体是鼠抗人IgG4的单克隆抗体。

4.一种快速检测囊型包虫病的免疫层析试条，包括以下组分：

样品垫、紧密连接于所述样品垫的含有胶体金标记抗体的金标垫、与所述金标垫紧密连接的纤维素膜和紧密连接于所述纤维素膜另一端的吸水垫；所述纤维素膜上远离金标垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置一条检测线；

所述的检测线由囊型包虫病的天然抗原组成，所述的囊型包虫病的天然抗原为来源于羊肝棘球蚴包囊液的上清液；所述的胶体金标记抗体为以人IgG为抗原免疫动物获得的抗体；所述的质控线由特异性结合胶体金标记抗体的抗抗体组成。

5.根据权利要求4的检测囊型包虫病的免疫层析试条，其特征在于，所述金标垫的胶体金标记抗体为以人IgG作为抗原免疫小鼠获得的单克隆抗体，所述质控线为羊抗鼠抗抗体。

6.根据权利要求5的检测囊型包虫病的免疫层析试条，其特征在于，羊肝棘球蚴包囊液的上清液蛋白浓度为1～10mg/mL，喷涂量为10μL/cm²；胶体金标记抗体浓度以蛋白浓度计为1～5mg/15～20mL；羊抗鼠抗抗体溶液浓度为0.1～5mg/mL，喷涂量为10μL/cm²。

7.根据权利要求4-6中的任一项的检测囊型包虫病的免疫层析试条，其特征在于，所述支持检测线和质控线的纤维素膜选自硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述支持胶体金标记抗体的金标垫选自玻璃纤维膜或聚脂膜；所述样品垫选自滤血膜、玻璃纤维或吸水纸，其中滤血膜是棉籽绒和纤维素的混合物或者玻璃纤维和纤维素混合物；所述吸水垫为吸水纸。

8.根据权利要求7的检测囊型包虫病的免疫层析试条，其特征在于，其中所述的纤维素膜宽度为2.5～3.0mm；吸水垫宽度为20～40mm，厚度为0.1～0.2mm；金标垫的宽度为5～10mm；样品垫宽度为20～40mm。

9.根据权利要求8的检测囊型包虫病的免疫层析试条，其特征在于，所述免疫层析试条背面设置一个起支撑作用的背板，背板材料为塑料。

10.根据权利要求9的检测囊型包虫病的免疫层析试条，其特征在于，将所述带有背板的免疫层析试条装入一个盒体中，该盒体对应于样品垫的部位设有检测孔，对应于检测线和质控线的部位设有观测窗。

11.根据权利要求4的检测囊型包虫病的免疫层析试条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备囊型包虫病的天然抗原，将来源于羊肝棘球蚴包囊液的上清液蛋白浓度调整到1～10mg/mL；

制备胶体金标记抗体，将1～5mg以人IgG为抗原免疫动物获得的抗体加入100mL胶体金溶液，离心取沉淀，复溶到15～20mL；

制备与胶体金标记抗体特异结合的抗抗体，将溶液浓度调整到0.1～5mg/mL；

(2)将囊型包虫病的天然抗原溶液喷涂到所述纤维素膜上形成检测线，将能与胶体金标记抗体特异结合的抗抗体溶液喷涂到所述纤维素膜的另一区域形成质控线；

将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入胶体金标记抗体溶液，制备金标垫；

(3)将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离检测线的一端，将金标垫粘贴在纤维素膜的靠近检测线的一端，将样品垫粘贴于金标垫上与所述纤维素膜相对的一端，得到检测囊型包虫病的免疫层析试条。

12.根据权利要求11的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备囊型包虫病的天然抗原，将来源于羊肝棘球蚴包囊液的上清液蛋白浓度调整到1～10mg/mL；

制备胶体金标记抗体，将1～5mg以人IgG为抗原免疫动物获得的抗体加入100mL胶体金溶液，离心取沉淀，复溶到15～20mL，加入蔗糖使蔗糖的终浓度为2％～10％；

制备与胶体金标记抗体特异结合的抗抗体，将溶液浓度调整到0.1～5mg/mL；

(2)将囊型包虫病的天然抗原溶液喷到所述纤维素膜上形成检测线，将能与胶体金标记抗体特异结合的抗抗体溶液喷到所述纤维素膜的另一区域形成质控线；将喷涂有检测线、质控线的纤维膜在37℃下干燥0.5～2小时；

将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入胶体金标记抗体溶液，制备金标垫；将金标垫在37℃下干燥0.5小时；

(3)将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离检测线的一端，将金标垫粘贴在纤维素膜的靠近检测线的一端，将样品垫粘贴于金标垫上与所述纤维素膜相对的一端，得到检测囊型包虫病的免疫层析试条。