[发明专利]人脂联素酶联免疫吸附检测试剂盒及其制备方法与应用

权利要求书

1、一种人脂联素酶联免疫吸附检测试剂盒，包括抗人APN单克隆抗体包被的酶标板，标准品冻干粉，检测抗体，酶标亲和素HRP-链霉素，样本试剂稀释液，TMB酶底物显色液，浓缩洗涤液0.1M pH7.4的磷酸盐缓冲液和终止反应液2M H₂SO₄，其特征在于：

标准品冻干粉为重组的gAPN蛋白标准品；

检测抗体为生物素标记的抗人APN单克隆检测抗体；

样本试剂稀释液为10mM pH7.4的磷酸盐缓冲液，其中含有0.05％Tween-20；

所述百分比为体积百分比。

2、一种如权利要求1所述人脂联素酶联免疫吸附检测试剂盒的制备方法，包括抗人APN单克隆抗体包被的酶标板、重组的gAPN蛋白标准品、检测抗体为生物素标记的抗人APN单克隆检测抗体的制备及10mM pH7.4的磷酸盐缓冲液和0.1M pH7.4的磷酸盐缓冲液及2MH₂SO₄的配制，其特征在于，

重组的gAPN标准品的制备方法是：应用PCR方法获得脂联素球状结构域gAPN基因，构建pET22b(+)/gAPN重组表达质粒转化入大肠杆菌BL21菌株，IPTG诱导表达His-gAPN融合蛋白，利用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白，SDS-PAGE及Western blot分析表达产物；

生物素标记的抗人APN单克隆检测抗体的制备方法是：按照Sigma公司生产的抗体生物素化试剂盒标记抗人APN单克隆抗体MAB1065。

3、一种如权利要求1所述人脂联素酶联免疫吸附检测试剂盒在人血APN含量检测中的应用。