[发明专利]一种融合蛋白及其用于检测荚膜组织胞浆菌的用途

权利要求书

1.一种荚膜组织胞浆菌融合蛋白M-GH17，其特征在于该融合蛋白是由如序列表SEQ ID No：3的氨基酸序列和SEQ ID No：4的氨基酸序列连接形成的多肽。

2.一种编码如权利要求1所述的融合蛋白M-GH17的DNA，其特征在于该DNA包含荚膜组织胞浆菌M基因片段和GH17基因片段，所述荚膜组织胞浆菌M基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，所述GH17基因片段如SEQ IDNo：2所示。

3.一种包含荚膜组织胞浆菌M基因片段和GH17基因片段并能融合表达如权利要求1所述蛋白M-GH17的重组大肠杆菌菌株。

4.如权利要求1所述的融合蛋白M-GH17的制备方法，其特征在于包含以下步骤：以分离的荚膜组织胞浆菌基因组DNA为模板，通过PCR方法扩增得到M基因的特异性片段和GH17基因的特异性片段；在原核表达载体PET-28a(+)中定向插入荚膜组织胞浆菌M基因片段，构建得到M基因片段的重组原核表达载体；在该重组原核表达载体中再定向插入荚膜组织胞浆菌GH17基因片段，构建得到M-GH17基因片段重组原核表达载体；将M-GH17重组原核表达载体转化宿主细胞，筛选重组单克隆，诱导后特异性表达，得到融合蛋白M-GH17。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述M-GH17重组原核表达载体转化宿主细胞时，所述宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于：从所述荚膜组织胞浆菌PCR扩增M基因片段所用的上游引物为：5′GCCATATGCCTCTAAACACGGCCGC 3′；下游引物为：5′GCGGATCCTTTGTTGTTGGCGCTGTTAA 3′。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于：从所述荚膜组织胞浆菌PCR扩增GH17基因片段所用上游引物为：5′GCGAATTCGGCCAGGTTTGGGCG 3′；下游引物为：5′GCCTCGAGTTAATCGACCATGAAGCACCAC 3′

8.一种用于荚膜组织胞浆菌鉴别诊断的ELISA试剂盒，包含常规ELISA试剂盒所用的包被液、封闭液、洗涤液、显色液A、显色液B、终止液，其特征在于：还包含如权利要求1所述的荚膜组织胞浆菌融合蛋白M-GH17，以及荚膜组织胞浆菌感染标准阳性血清和标准阴性血清。