[发明专利]从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法及专用磁性分离器

说明书

技术领域

本发明涉及一种从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法及专用磁性分离器。

背景技术

在医院或科研工作中经常要在血清、血浆、全血或乳汁、唾液、分泌液、胸腔积液、尿液、精液、月经血、阴道分泌物、粪便、脑脊液等包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的检测。现有分离纯化核酸的常规方法有(1)酚提取/沉淀法：将细胞裂解后离心分离含核酸的水相，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1体积)混合液，两相经漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸)或简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸)后离心分离，再将核酸盐用有机溶剂沉淀，通过沉淀浓缩核酸，改变核酸溶解缓冲液的种类以及去除某些杂质分子。(2)层析法，层析法是利用不同物质某些理化性质的差异而建立的分离分析方法。包括吸附层析、亲和层析、离子交换层析等方法。(3)密度梯度离心法，采用氯化铯作为密度梯度离心的标准介质，梯度液中的溴化乙锭与核酸结合，离心后形成的核酸区带经紫外灯照射，产生荧光而被检测，用注射针头穿刺回收后，通过透析或乙醇沉淀除去氯化铯而获得纯化的核酸。上述分离纯化核酸的方法需要用到的试剂较多，步骤较繁琐，且分离纯化后所得到的核酸纯度不高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法。以实现操作步骤简单快速、使用试剂少，所获得的核酸纯度更高。

本发明的目的还在于提供一种专用于本方法的磁性分离器。

从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法包括以下步骤：

(1)裂解释放核酸：将待分离的样品加入离心管中，按已有技术加入裂解液进行裂解用涡旋仪将裂解液与样品溶液充分混匀，放置3-5分钟；温度为室温，最好是高于20℃；

(3)磁性分离：在室温条件下，在上述裂解液与样品溶液混合液中加入PH为7.0±0.5的含固相载体的缓冲溶液中，核酸分子被固相载体吸附包被，混匀后置于磁性分离器上，放置5-10分钟，磁性颗粒被磁性底座内的磁铁吸引而聚集在离心管壁一侧；

(4)洗涤纯化1-3次：加入无机洗涤液和有机疏水物，充分混匀后再次置于磁性分离器上，上层疏水环境中核酸更好地结合到磁性颗粒，而下层的无机物将杂质溶解。将移液枪深入离心管底，先逐步将杂质及无机物吸到移液枪头中，最后吸出有机物，剩下包被有核酸的磁性颗粒；

所述固相载体是磁性颗粒、硅土、硅胶、玻璃基质等；

所述磁性颗粒是包被有高交联聚苯乙烯的铁氧化物，直径为1um。

所述无机洗涤液是100mM三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(pH 7.5±0.5)和1mM EDTA 乙二胺四乙酸的混合液.所述有机疏水物为矿物油或石蜡油。

所述包含核酸的病毒或细胞的样品包括血清、血浆、全血、乳汁、唾液、分泌液、胸腔积液、尿液、精液、月经血、阴道分泌物、粪便、脑脊液、细菌。

本发明专用磁性分离器是由磁性底座和离心管架二部分活动连接而成，所述磁性底座是由一个长条形空座和二端的插孔组成，在长条形空座内腔均匀分布有磁铁，所述离心管架上设有二排共10-30个离心管孔，在离心管架的二端设有可插入磁性底座二端插孔的插条。

本发明的优点：只需要加入简单的两种溶液，采用一个磁性分离器就可以完成对核酸的分离和纯化，简化了设备，操作过程简单快速、使用试剂少。使核酸分子的分离数量增加，能够通过一个流程同时有效地分离和纯化双链DNA、单链DNA和RNA分子，所获得的核酸纯度更高。

附图说明

图1和图2是用无机相加有机相纯化荧光定量PCR检测定量结果图；

图3和图4是用普通的无机相纯化荧光定量PCR检测定量结果图；

图5是磁性分离器组装示意图；

图6为磁性分离器整体示意图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作出进一步说明：

实施例1：血清中乙型肝炎病毒核酸的提取和分离纯化。