[发明专利]从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法及专用磁性分离器有效
申请号: | 200910042435.1 | 申请日: | 2009-01-07 |
公开(公告)号: | CN101481400A | 公开(公告)日: | 2009-07-15 |
发明(设计)人: | 戴立忠;蔡鸣镝;熊晓燕 | 申请(专利权)人: | 戴立忠 |
主分类号: | C07H21/00 | 分类号: | C07H21/00;C07H1/06 |
代理公司: | 长沙星耀专利事务所 | 代理人: | 赵静华 |
地址: | 410205湖南省*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 包含 核酸 病毒 细胞 样品 分离 纯化 方法 专用 磁性 分离器 | ||
1.一种从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)裂解释放核酸:将待分离的样品加入离心管中,加入裂解液进行裂解,用涡旋仪将裂解液与样品溶液充分混匀,放置3-5分钟;温度为室温;
(2)磁性分离:在室温条件下,在上述裂解液与样品溶液混合液中加入pH为7.0±0.5的含固相载体的缓冲溶液中,核酸分子被固相载体吸附包被,混匀后置于磁性分离器上,放置5-10分钟,固相载体被磁性底座内的磁铁吸引而聚集在离心管壁一侧;
所述固相载体是磁性颗粒;所述磁性颗粒是包被有高交联聚苯乙烯的铁氧化物;
(3)洗涤纯化1-3次:加入无机洗涤液和有机疏水物,充分混匀后再次置于磁性分离器上,上层疏水环境中核酸更好地结合到磁性颗粒,而下层的无机物将杂质溶解;将移液枪深入离心管底,先逐步将杂质及无机物吸到移液枪头中,最后吸出有机物,剩下包被有核酸的磁性颗粒。
2.根据权利要求1所述的从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法,其特征在于,所述无机洗涤液是100mM pH 7.5±0.5的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐和1mM 乙二胺四乙酸的混合液,所述有机疏水物为矿物油或石蜡油。
3.根据权利要求1所述的从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法,其特征在于,所述包含核酸的病毒或细胞的样品包括血清、血浆、全血、乳汁、唾液、分泌液、胸腔积液、尿液、精液、月经血、阴道分泌物、粪便、脑脊液、细菌。
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