[发明专利]一种高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法及其检测试剂盒无效
| 申请号： | 200910041621.3 | 申请日： | 2009-08-03 |
| 公开（公告）号： | CN101988926A | 公开（公告）日： | 2011-03-23 |
| 发明（设计）人： | 彭涛;古艳丽 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘孟斌 |
| 地址： | 510663 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高尔基 蛋白 gp73 夹心 elisa 定量 检测 方法 及其 试剂盒 | ||
1.一种高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法，其特征在于，用两株针对GP73胞膜外区不同表位的单克隆抗体分别作为包被抗体和检测抗体，通过底物显色检测GP73，通过标准品制备的标准曲线确定GP73的含量。
2.根据权利要求1所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法，其特征在于，所述的针对GP73胞膜外区不同表位的单克隆抗体识别的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的序列。
3.根据权利要求1所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法，其特征在于，所述的针对GP73胞膜外区不同表位的单克隆抗体识别的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的序列。
4.根据权利要求1所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法，其特征在于，所述的包被抗体的浓度为1～5μg/mL。
5.根据权利要求1所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法，其特征在于，所述的检测抗体的浓度为5～10μg/mL，所述检测抗体的稀释液为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液含体积百分比浓度为5％的小牛血清，质量百分比浓度为1～3％的聚乙二醇(PEG)和体积百分比浓度为0.1～0.5％的吐温20(Tween20)。
6.根据权利要求1所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法，其特征在于，所述的检测抗体为辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体。
7.根据权利要求1所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测方法，其特征在于，所述的HRP标记的底物显色试剂为3，3′5，5′-四甲基联苯胺(TMB)单组分显色液。
8.一种高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测试剂盒，包括包被抗体和检测抗体、包被液、封闭液、样品稀释液、显色剂、终止液、洗涤液和标准品，其特征在于，所述包被抗体和所述检测抗体为针对GP73胞膜外区不同表位的单克隆抗体，所述标准品为GP73蛋白。
9.根据权利要求8所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭液为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液含体积百分比浓度为5％的小牛血清、体积百分比浓度为0.1％的吐温20(Tween20)和体积百分比浓度为0.01％的防腐剂。
10.根据权利要求8所述的高尔基蛋白GP73的夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液含体积百分比浓度为0.1％的吐温20(Tween20)。
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