[发明专利]一种实时荧光RT-PCR检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种实时荧光RT-PCR检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒，特别是涉及以一步法实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术早期、快速诊断甲型H1N1流感病毒感染的试剂盒。本试剂盒具有很高的灵敏度和特异性，通过本发明的试剂盒实现对咽拭子、鼻咽分泌物等呼吸道样本以及血清等样品中的甲型H1N1流感病毒进行早期快速诊断。

背景技术

流行性感冒简称流感，是由甲、乙、丙三种流感病毒引起的急性呼吸道传染病。甲型流感病毒根据其表面(H和N)结构及其基因特性的不同又可分成许多亚型，至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型(H1-H16)，神经氨酸酶9个亚型(N1-N9)。

猪流感是一种因甲型流感病毒引起的猪呼吸系统疾病。猪流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，甲型流感病毒属(Influenza virus A)。典型病毒颗粒呈球状，直径为80nm～120nm，有囊膜。囊膜上有许多放射状排列的突起糖蛋白，分别是血凝素HA、神经氨酸酶NA和M2蛋白。病毒颗粒内为核衣壳，呈螺旋状对称，直径为10nm。猪流感病毒为单股负链RNA病毒，基因组约为13.6kb，由大小不等的8个独立片段组成。尽管不同亚型之间可以组成很多种流感病毒血清型，但从猪身上分离到四种主要的亚型：H1N1、H1N2、H3N2和H3N1，而造成人感染猪流感病毒的血清型主要为其中的三种：H1N1、H1N2和H3N2。

猪流感病毒在猪群中全年可以传播，但多数暴发于秋季末期和冬季，发病率较高，病死率较低。猪是人源、禽源和猪源流感病毒的惟一共同易感宿主，它能将猪流感病毒传播给人或鸟类。美国曾于1976年在新泽西州迪克斯堡的士兵中出现猪流感爆发，引起200多例病例，其中至少4名士兵进展成肺炎，1人死亡，该病毒与当时从猪体内分离的病毒相同，首次证实了在自然条件下，猪流感病毒可从猪传播给人。1988年，美国出现了猪流感人际间传播的迹象，接触过一例猪流感病例的医护人员中出现了轻微的流感样疾病，并在血清中检测出猪流感抗体。2005年12月至2009年2月期间，美国共报道了12例人感染猪流感病例，但均未出现死亡。1999年10月，香港1名10月龄女婴感染了猪流感病毒H3N2，现已完全康复。这些年来，世界各地都有人感染猪流感病毒不同病毒株的报道，但并没有大规模流行。

2009年3月，墨西哥和美国等先后发生人感染猪流感病毒，为甲型流感病毒，H1N1亚型猪流感病毒毒株，该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片断，是一种新型猪流感病毒，世界卫生组织(WHO)称之为甲型H1N1流感病毒，可以人传染人。自2009年4月23日起，截至4月27日，全球共4个国家报道了实验室确诊的人感染甲型H1N1流感病毒病例，其中美国共计40例，均为轻症病例；墨西哥确诊26例，其中7例死亡；加拿大和西班牙分别报告了6例和1例，均无死亡病例。

甲型H1N1流感病毒可直接从猪传播至人，亦可出现人际间传播。感染病毒的猪或人是主要的感染来源，隐性感染者也具有传染性。人也可能通过接触到被甲型H1N1流感病毒污染的物品后触摸口鼻而获得感染，因此，被甲型H1N1流感病毒污染的环境也是潜在的感染来源。传播途径与季节性流感类似。

人感染甲型H1N1流感病毒后，现有资料表明，传染期为发病前1天至发病后7天。若病例发病7天后仍有发热症状，表示仍具有传染性。儿童，尤其是幼儿，传染期可能长于7天。潜伏期目前尚不明确，参照流感的潜伏期一般为1-3天。临床症状与流感相似，包括发热、咳嗽、咽痛、躯体疼痛、头痛、畏寒和疲劳等。有些人还会出现腹泻和呕吐，病情可迅速进展，突然高热、肺炎，重者可以出现呼吸衰竭、多器官损伤，导致死亡。近期分离到的该病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感，对金刚烷胺和金刚乙胺耐药。因此，世界卫生组织和美国CDC均建议使用奥司他韦或扎那米韦治疗和预防人感染甲型H1N1流感病毒，但尚无有效的预防疫苗。

甲型H1N1流感病毒与流感、禽流感、上感、肺炎、SARS、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、军团菌肺炎、衣原体、支原体肺炎等在症状上很难鉴别。正由于缺乏有效的疫苗，症状上鉴别非常困难，因此在如此严峻的疫情情况下急需开发一种早期快速诊断甲型H1N1流感病毒感染的试剂盒。