[发明专利]一种实时荧光RT-PCR检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种实时荧光RT-PCR检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒，试剂盒包括：(1)分别装有RNA提取液、H1亚型反应体系、N1亚型反应体系、阴性质控品、H1亚型阳性质控品、N1亚型阳性质控品并加盖密封的多个试剂瓶或管，和(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中H1亚型反应体系包括H1亚型引物探针混合液、RT-PCR反应液、RT-PCR酶系，其特征在于H1亚型引物探针混合液中H1亚型正向引物的序列为：5’-GGCCATTGCCGGTTTCA-3’，H1亚型反向引物的序列为：5’-TTGTTAGTAATCTCGTCAATGGCATT-3’，正、反向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基。

2.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于H1亚型引物探针混合液中H1亚型寡核苷酸探针的序列为：5’-ATATGCAGCCGACCTGAAGAGCACACA-3’。

3.根据权利要求1的试剂盒，其中N1亚型反应体系包括N1亚型引物探针混合液、RT-PCR反应液、RT-PCR酶系，其特征还在于N1亚型引物探针混合液中N1亚型正向引物的序列为：5’-CCAGTATCGTCTAATGGAGCAAAT-3’，N1亚型反向引物的序列为：5’-AATGCTTTTAGTTCTCCCTATCCAA-3’，正、反向引物引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基。

4.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于N1亚型引物探针混合液中N1亚型寡核苷酸探针的序列为：5’-CACCATTGCCGTATTTGAATGAAAACCC-3’。

5.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于H1亚型正、反向引物，N1亚型正、反向引物的浓度均为5pmol/反应，H1亚型寡核苷酸探针、N1亚型寡核苷酸探针的浓度均为5pmol/反应。

6.根据权利要求1的试剂盒，RT-PCR酶系由逆转录酶(RT酶)、热启动Taq酶、RNasin、dNTPs、酶系稀释液组成，其特征还在于其中RT酶用量为1.5～3.5U/反应、热启动Taq酶用量为3～7U/反应、RNasin用量为15～25U/反应、dNTPs浓度为0.20mmol/L。

7.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增的最佳反应温度和时间为：50℃逆转录15min，1个循环；94℃15min，1个循环；最后95℃15s，55～60℃45s，45个循环(收集荧光信号)。