[发明专利]检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒及其应用方法

权利要求书

1、检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒，包括盒体，其特征是：

1)在所述试剂盒内设有荧光定量PCR反应液、至少四种念珠菌的阳性质控品和阴性质控品；

2)所述荧光定量PCR反应液含有特异性引物和至少四种念珠菌相对应的荧光探针，所述特异性引物序列如序列表SEQ ID №：1所示；

3)所述侵袭性念珠菌的阳性质控品是由白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌或由白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌加上若干种其他侵袭性念珠菌的标准菌株经“煮沸法”获得的DNA样品，所述阴性质控品为灭菌三蒸水。

2、如权利要求1所述的检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒，其特征是：所述侵袭性念珠菌的阳性质控品是由白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌和热带念珠菌的标准菌株经“煮沸法”获得的DNA样品；与白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌相对应的荧光探针序列如序列表SEQ ID №：2所示。

3、如权利要求1所述的检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒，其特征是：所述其他侵袭性念珠菌可以是近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、葡萄牙念珠菌和乳酒念珠菌中的一种或任意二种以上组合。

4、检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒的应用方法，其特征在于包括以下步骤：

1)用“煮沸法”从待测标本中提取DNA；

2)分别取第1)步中待测标本的DNA和与所述DNA同样量的阳性质控品，加入到含有荧光定量反应液的PCR反应体系中；

3)用荧光定量PCR检测仪进行检测，根据反应结果的Ct值，对检测结果进行判断。

4)所述结果判断方法是：检测样品Ct值≤35.0者，且出现典型的扩增曲线判为阳性；无Ct值，且无典型的扩增曲线者判为阴性；若Ct值>35.0，且出现典型的扩增曲线的样本，按前述步骤重做。重做结果出现Ct值和典型的扩增曲线者为阳性，否则为阴性。

5、如权利要求4所述检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒的应用方法，其特征在于：荧光定量PCR反应体系的反应条件是95℃变性10min，95℃30s，59℃1min，59℃1min，扩增50个循环。

6、如权利要求4所述检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒的应用方法，其特征在于：所述Ct值指荧光信号在每次循环的延伸阶段收集，荧光信号阈值以刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点为准，扩增产物的荧光信号达到阈值时所需的扩增循环次数。