[发明专利]菊花滑刃线虫的检测方法及诊断试剂盒

权利要求书

1.一种检测菊花滑刃线虫（Aphelenchoides  ritzemabosi）的方法，其包括：

（a）从可疑植物材料或土样中分离出待检测线虫，提取DNA;

（b）以步骤（a）中获得的DNA为模板，使用SEQ ID NO：1和SEQ ID NO:2的引物对，进行聚合酶链式反应，得到扩增产物；

（c）检测步骤（b）中获得的扩增产物，根据检测结果判断菊花滑刃线虫的存在。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述可疑植物材料或土样中存在大量线虫时，采用酚氯仿提取法提取DNA。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述可疑植物材料或土样只存在单条线虫时，步骤（a）中所述的提取包括以下步骤：

（1）将单条线虫加入含有WLB溶液的管中；

（2）于-70℃放置30-60 min；95℃放置15-20 min；55-65℃放置2min；

（3）再加入蛋白酶K，55-65℃处理30 min-2 h；95℃处理15-20min，以获得作为单条线虫DNA模板的产物。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物材料为菊科植物材料、茄科植物材料或罂粟科植物材料。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物材料为烟草、草莓、珠兰、百合、蒲包花、飞燕草或夹竹桃的种苗或植株。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（c）中所述检测步骤（b）中获得的扩增产物的方法为电泳检测。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述菊科植物为翠菊、金光菊、大丽菊或百日草。

8.一种用于诊断菊花滑刃线虫病的试剂盒，其包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的引物对。