[发明专利]一种基于金纳米壳的抗氧化剂清除H2O2能力的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米生物分析技术领域，特别涉及一种基于金纳米壳的抗氧化剂清除H₂O₂能力的测定方法。

背景技术

机体代谢过程中活性氧物种(ROS)不断地通过非酶促反应和酶促反应产生，在正常生理情况下，ROS的生成与清除处于动态平衡，可维持有利无害的极低水平。由于内源性或外源性刺激使机体代谢异常而产生大量ROS，或机体抗氧化物质不足，使促氧化剂/抗氧化剂间平衡失常，则使机体处于氧化应激状态，可氧化损伤生物分子，并进一步引起细胞死亡和组织损伤，与很多疾病过程相关。由此可见，抗氧化剂对于ROS的清除能力是将其维持在一个较低水平，不会对人体产生健康威胁的重要考察指标。H₂O₂是一种重要的活性氧物种，它在人体生理条件下可通过多种过氧化物酶体产生，如葡萄糖氧化酶、D-氨基酸氧化酶等。此外，超氧自由基在超氧化物岐化酶的催化作用下也可产生H₂O₂。H₂O₂和超氧阴离子自由基(O₂^·-)一起可导致细胞损伤，并进一步转变成其他ROS，如羟自由基(OH)等。H₂O₂作为活性氧物种的重要组成部分，抗氧化剂对其清除能力的大小是评价蔬菜、水果及保健品等对人体健康和保健功效的重要指标，同时也是蔬菜、水果及保健品在生产和保存过程中质量评价的重要指标。目前，现有的评价抗氧化剂清除H₂O₂能力的方法主要包括以下几种：(1)利用H₂O₂本身在230nm处的紫外吸收现象，当存在抗氧化剂时，其吸收峰强度明显减弱。但由于待测样品在该波长处也有可能存在吸收峰，就降低了该检测方法的准确性。(2)H₂O₂可以在辣根过氧化物酶的作用下将7-羟基-6-甲氧基香豆素氧化成一种非荧光产物，当存在H₂O₂清除剂时，7-羟基-6-甲氧基香豆素的氧化被抑制，并且这种清除能力可以通过荧光光度计来检测。另一种广泛使用的荧光光度法基于homovanillic acid(HVA)在H₂O₂和辣根过氧化物酶的作用下形成一种稳定的具有荧光效应的联苯二聚体，而H₂O₂清除剂的存在会阻碍HVA的氧化。这类基于过氧化物酶的方法对于抗氧化剂是直接与H₂O₂反应还是与H₂O₂和酶反应的中间产物相作用不能做出明确的判定。此外，某些抗氧化剂，如抗坏血酸、栎精二水合物、硫醇等本身即是过氧化物酶的底物，那么对于其清除H₂O₂的能力也会产生错误的评价。(3)一种非酶的过氧草酸脂类化学发光检测法。该方法利用H₂O₂和咪唑催化的芳香草酸脂的氧化形成一种高能量的中间产物dioxetanedione，它再将能量传递给荧光团9，10-diphenylanthracene，该荧光团从激发态回到基态的过程即以光的形式释放出能量。当反应体系中存在清除H₂O₂的化合物时，该化学发光反应将会被抑制，可通过荧光计来定量检测。该反应是在非极性环境中进行的，因此该方法通常被用来检测亲脂性抗氧化剂清除H₂O₂的能力。该方法的主要缺陷在于被用作荧光团的9，10-diphenylanthracene是一种致癌物。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简便且检测灵敏度高的基于金纳米壳的抗氧化剂清除H₂O₂能力的测定方法。

本发明采用如下技术方案：

本发明所述的测定抗氧化剂清除H₂O₂能力的方法，即利用在H₂O₂介导金纳米壳形成体系中加入抗氧化剂后光谱性质的变化来测定抗氧化剂清除H₂O₂的能力。

本发明所述的测定抗氧化剂清除H₂O₂能力的方法，即：