[发明专利]一种基于金纳米棒端面自组装检测微囊藻毒素-LR的方法

权利要求书

1.一种基于金纳米棒端面自组装检测微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于 包括包被原的修饰，抗体的修饰，修饰的包被原和金纳米棒的偶联，修饰的抗 体和金纳米棒的偶联，反应条件的优化，标准曲线的测定，实际样本的检测；

(1)包被原的修饰：将微囊藻毒素-LR包被原与硫辛酸相偶联得到修饰的包 被原；

①0.3mL的含硫辛酸的乙醇溶液，含硫辛酸1.625mg，与0.2mL的微囊藻毒 素-LR包被原溶液混合；

②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入步骤(1)①所述溶液中 后室温反应4h；

③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，每天换液3次；

④将修饰后的包被原放在4℃备用；

(2)抗体的修饰：将抗微囊藻毒素-LR抗体与硫辛酸相偶联得到修饰的抗微 囊藻毒素-LR抗体；

①0.3mL的含硫辛酸的乙醇溶液，含硫辛酸1.625mg，与0.4mL抗微囊藻 毒素-LR抗体混合；

②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入步骤(2)①所述溶液中 后室温反应4h；

③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，每天换3次透析液；

④将修饰后的抗体放在4℃备用；

(3)用步骤(1)得到的修饰的包被原与金纳米棒的端面偶联得到金纳米棒-包 被原探针；

金纳米棒-包被原探针的制备：包被原60μL用pH 3.8、含有0.1％PEG20000 的940μL、0.005mol/L CTAB的溶液进行稀释；

将pH 3.8、0.5mL、2n mol/L重悬后的金纳米棒溶液逐滴滴加到硫辛酸修饰 的微囊藻毒素-LR包被原的稀释液中，室温搅拌反应4h，反应结束后6000rpm离 心10min，运用pH 3.8、含有0.1％PEG20000的0.005mol/L CTAB溶液1mL中进行 重分散，用该溶液洗涤两遍，最后用pH 3.8、含有0.1％PEG20000的0.005mol/L CTAB溶液50μL进行重分散，此偶联物置于4℃保存；

(4)用步骤(2)得到的修饰的抗微囊藻毒素-LR抗体与金纳米棒的端面偶联 得到金纳米棒-抗体探针；

金纳米棒-抗体探针的制备：采用晶种生长法合成金纳米棒，再经过7500rpm 离心15min去除金纳米棒溶液中多余的Vc、AgNO₃和小的球形粒子金纳米棒后， 利用pH 3.8、含有0.1％聚乙二醇PEG20000的0.005mol/L十六烷基三甲基溴化铵 CTAB溶液进行重悬；重悬液用1mol/L HCl调整至pH 3.8；0.5mL、2n mol/L重分 散的金纳米棒溶液逐滴滴加到由50μL稀释到1mL的硫辛酸修饰的微囊藻毒素 -LR抗体的稀释液中，室温搅拌反应4h，反应结束后6000rpm离心10min，运用 pH 3.8、含有0.1％PEG20000的1mL 0.005mol/L CTAB的溶液进行重分散，用该溶 液洗涤两遍，最后用pH 3.8、含有0.1％PEG20000的50μL 0.005mol/L CTAB的溶 液进行重分散，此偶联物置于4℃保存；

(5)对抑制反应的各个条件进行优化；

(6)标准曲线的建立：利用间接竞争免疫检测原理，将微囊藻毒素-LR和步 骤(3)金纳米棒-包被原探针同时加入到一个离心管中，而后向离心管中加入步 骤(4)金纳米棒-抗体探针，混匀，通过微囊藻毒素-LR与金纳米棒-包被原探针 竞争金纳米棒-抗体探针的结合位点，通过微囊藻毒素-LR浓度的不同会使形成 的粒子形成不同的粒径分布，通过纳米粒度仪检测粒径的变化从而检测微囊藻 毒素-LR的浓度，建立粒径-微囊藻毒素-LR浓度的标准曲线；

(7)检测样品中微囊藻毒素-LR的浓度。