[发明专利]一种纳米金标记-黄曲霉毒素B1新型检测方法

权利要求书

1.一种纳米金标记黄曲霉毒素B₁的新型检测方法，其特征在于：

(1)采用纳米金标记AFB₁人工抗原，使其与AFB₁标准抗原直接竞争同固定化抗体发生免疫反应；

(2)加入银增强溶液，以金为核沉积生长银，通过检测吸光度来确定纳米金表面沉积的银的量，从而对AFB₁进行间接定量检测。

(3)进一步将银化学溶出，采用溶出化学发光检测技术，通过二次信号放大，实现了AFB₁的超灵敏化学发光检测。

2.如权利要求1所述一种纳米金标记黄曲霉毒素B₁的新型检测方法，其特征在于纳米金标记AFB₁人工抗原的制备：

取1mL纳米金于离心管中，加1.5mL溶于0.01mol/L磷酸缓冲液(PBS)中的人工抗原于其中，充分混合。室温下放置1h，12000g离心45min，除去上清液后，加入1.5mL 1％BSA，重悬沉淀物，置冰箱4℃保存备用。

3.如权利要求1所述一种纳米金标记黄曲霉毒素B₁的新型检测方法，其特征在于银增强液的制备：

0.85g氢醌溶于15mL超纯水中；1.175g柠檬酸三钠/1.275g柠檬酸溶于5mL超纯水中；0.5g硝酸银溶于2mL超纯水中，溶液均需新鲜配制，确保无结晶体析出且无色，氢醌和柠檬酸混合液应在银增强前30分钟左右保持37℃温育。

4.如权利要求1所述一种纳米金标记黄曲霉毒素B₁的新型检测方法，其特征在于进一步将银化学溶出，采用溶出化学发光检测技术实现对黄曲霉毒素的超灵敏检测。

此过程分两步：

第一步：用HNO₃(v/v)来溶解银，溶解时间采用15分钟。

第二步：溶解所得的银离子溶液中均加入60μL 5mol/L的NaOH来调节其酸度。然后该溶液转移至含有200μL 2％(m/V)K₂S₂O₈，40μL 6×10^-3mol/L MnSO₄和36μL 1∶1(v/v)H₃PO₄的离心管中，混合均匀后马上放入90℃水浴中加热7分钟。流水冷却中止该催化反应并用5mol/L NaOH调节溶液的pH值至10。取该溶液50μL转移至石英发光管中，然后注射入200μL luminol(1μmol/L，pH13.5)同时在发光分析仪上记录发光信号。该实验中银离子的化学发光强度和金标抗原的浓度成正比(与样品中AFB₁的含量成反比)，可以得出化学发光信号和待测AFB₁的关系。