[发明专利]毛果杨离体器官再生植株的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组培再生技术领域，具体涉及毛果杨离体器官再生植株的方法。

背景技术

毛果杨主要分布于北美西部，在我国属较难获得的有关材料。2002年美国能源部橡 树岭国家实验室(ORNL)和联合基因组研究所(JGI)启动了杨树全基因组的测序计划， 其材料来源于毛果杨(Populus trichocarpa)的一个无性系(Nisqully-1)。本发明人对 这个无性系的组织培养进行了深入研究，建立了快速繁殖体系。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种毛果杨离体器官再生植株的方法，以填补国 内乃至世界空白。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

毛果杨离体器官再生植株的方法，将毛果杨的茎段或叶柄在含0.001～0.005mg/L TDZ的MS培养基上培养9～10天，再转接至含0.001～0.002mg/L TDZ的MS培养基上 培养14～16天，诱导出不定芽；将诱导出的不定芽继续继代在含0.001～0.002mg/L TDZ 的MS培养基上进行壮苗，18～22天后，苗高可达4～5cm，再转接于大量元素为1/2的 MS培养基上，18～22天可直接生根。

其中，优选的技术方案是：将毛果杨的茎段或叶柄在含0.003～0.005mg/L TDZ的 MS培养基上培养9～10天，再转接至含0.001mg/L TDZ的MS培养基上培养14～16天， 诱导出不定芽。更优选的技术方案是：将毛果杨的茎段或叶柄在含0.005mg/L TDZ的 MS培养基上培养9～10天，再转接至含0.001mg/L TDZ的MS培养基上培养14～16天， 诱导出不定芽。最优选的技术方案是：将毛果杨的茎段或叶柄在含0.005mg/L TDZ的 MS培养基上培养10天，再转接至含0.001mg/L TDZ的MS培养基上培养15天，诱导 出不定芽。

其中，优选的技术方案是：将诱导出的不定芽继续继代在含0.001mg/L TDZ的MS 培养基上进行壮苗，18～22天后，苗高可达4～5cm，再转接于大量元素为1/2的MS培 养基上，18～22天可直接生根。最优选的技术方案是：将诱导出的不定芽继续继代在含 0.001mg/L TDZ的MS培养基上进行壮苗，20天后，苗高可达4～5cm，再转接于大量元 素为1/2的MS培养基上，20天可直接生根。

有益效果：本发明的毛果杨离体器官再生植株的方法，易于操作和实现，为开展杨 树功能基因研究创造了基本条件。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的具体的物料配比、培养条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会 限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：不同细胞分裂素对不定芽诱导的影响。

1材料与方法

1.1材料：

毛果杨试管苗。

1.2方法：

分别采用无菌苗的茎段、叶柄及叶片诱导不定芽，以MS为基本培养基，附加不同 浓度的6-BA(六-苄基嘌呤)、TDZ(噻苯隆)、2ip(异戊烯腺嘌呤)和ZT(玉米素) 外源激素，蔗糖浓度均为3％(w/w)，pH5.7，光照强度2000Lx，每日光照16h，温度 23～28℃。

2结果与分析：

将长为1cm左右的茎段、叶柄及1×1cm大小的叶片分别接种于MS附加各种细胞 分裂素的培养基上，培养20d后结果见表1。

由表1可知，三种外植体在MS分别附加4种不同种类细胞分裂素的培养基上均无 法直接诱导出不定芽。茎段和叶柄可诱导出愈伤组织，诱导率在0～100％不等，叶片诱 导率为零。在含TDZ的培养基上，随着TDZ浓度的增加茎段愈伤组织诱导率可达100％。 不同外源激素组合的培养基产生的愈伤组织均有不同程度的玻璃化现象，且随细胞分裂 素浓度增加而有所严重。

表1不同细胞分裂素对不定芽诱导的影响

(续表1)

注：A为茎段端部产生的愈伤组织，B为叶柄端部产生的愈伤组织，C为叶片产生的愈伤组织(无)

实施例2：最佳组培再生条件的摸索。