[发明专利]耐盐性胶质芽孢杆菌的筛选培养方法

权利要求书

1、一种耐盐性胶质芽孢杆菌的筛选培养方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)将胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)在无氮培养基上活化后，转接于抑制荚膜生长的液体培养基中培养至对数生长期，离心收集菌体；

(2)用稀释后的海水或者含钾卤水悬浮菌体，并将菌体浓度稀释至10³～10⁵万个/ml，得菌体悬浮液，将菌体悬浮液用辐射诱变或者化学诱变方法进行诱变，将诱变后的菌体悬浮液离心，获得诱变菌体；

(3)取诱变菌体进行筛选、复筛，获得耐盐性菌株；方法如下：

1)用筛选培养基悬浮诱变菌体，调整诱变菌体浓度至10²～10³万个/ml，充分摇匀后，分装于96孔培养板中，每孔100～200μl；

2)25～32℃培养5～7天，用分光光度计检测96孔培养板中的诱变菌吸光值，选取96孔培养板中的吸光值为0.2～0.5的诱变菌体进行复筛；

3)将吸光值为0.2～0.5的诱变菌体稀释至10²～10³万个/ml，取100～200μl诱变菌体稀释液涂布于复筛培养基平板上，25～32℃培养3～5天，重复3～5次，出现黄色晕圈菌落为目标菌落，将目标菌落在复筛培养平板上进行2～3次单菌落纯化后获得耐盐性胶质芽孢杆菌。

2、根据权利要求1所述的耐盐性胶质芽孢杆菌的筛选培养方法，其特征在于，其步骤如下：按照步骤(2)、(3)循环进行四～五级诱变、筛选、复筛，获得在不同浓度的海水或者含钾卤水中保持活力的耐盐性胶质芽孢杆菌；其中：

一级诱变时悬浮菌体所用的稀释后的海水或者含钾卤水浓度为：海水或者含钾卤水∶蒸馏水＝1∶100；

二级诱变时悬浮菌体所用的稀释后的海水或者含钾卤水浓度为：海水或者含钾卤水∶蒸馏水＝1∶25；

三级诱变时悬浮菌体所用的稀释后的海水或者含钾卤水浓度为：海水或者含钾卤水∶蒸馏水＝1∶10；

四级诱变时悬浮菌体所用的稀释后的海水或者含钾卤水浓度为：海水或者含钾卤水∶蒸馏水＝1∶5；

五级诱变时悬浮菌体所用的稀释后的海水或者含钾卤水浓度为：海水或者含钾卤水∶蒸馏水＝1∶1。

3、根据权利要求1或2所述的耐盐性胶质芽孢杆菌的筛选培养方法，其特征在于，步骤(3)的1)中所述的筛选培养基为：蔗糖5.0～10.0g，稀释后的海水或者含钾卤水1000ml，pH为7.0～7.5；步骤(3)的3)中所述的复筛培养基为：蔗糖5.0～10.0g，琼脂粉15.0～20.0g；溴酚蓝或甲基红指示剂0.002～0.005g·L-1，稀释后的海水或者含钾卤水1000ml，pH 7.0～7.5。