[发明专利]一种三萜皂苷单体的工业化制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种从中药威灵仙中提取分离一种三萜皂苷单体的制备方法。

背景技术

威灵仙为我国常用中药材，自古以来，多种毛茛科铁线莲属植物的干燥根及根茎被作为威灵仙药用。中国药典收载威灵仙药材来源为毛茛科铁线莲属植物威灵仙Clematis chinensisOsbeck，棉团铁线莲Clematis hexapetala Pall.或东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根及根茎。秋季采挖，除去泥沙，晒干。威灵仙具有祛风除湿，通络止痛的功效。临床上用于风湿痹痛，肢体麻木，筋脉拘挛，屈伸不利，骨哽咽喉等症，铁线莲属植物中富含皂苷类成分，现已从其中分离鉴定出60余种齐墩果烷型三萜皂苷，其苷元主要为齐墩果酸和常春藤苷元等，这些皂苷据报道具有抗肿瘤、抗炎等多种药理活性。

发明人前期的研究成果已表明，威灵仙药材中的总皂苷部位具有显著的抗免疫性炎症及镇痛作用(专利号：ZL2005100408257)。而占总皂苷部位50％以上的一种三萜皂苷：3-O-β-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-O-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基]齐墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯(3-O-β-[(O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-O-β-D-ribopyranosyl-(1→3)-α-O-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl)oxy]olean-12-en-28-olic acid O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl ester)(以下简称威灵仙皂苷AR，英文名：clematichinenoside AR)，分子式为：C₈₂H₁₃₄O₄₃，分子量为：1806，其结构式如下：

威灵仙皂苷AR是发挥上述多种药理活性的主要物质基础，具有重要的应用价值(ZL2005100408242)。以往该化合物的分离主要经过下列步骤：药材用50％的乙醇液提取，提取液减压浓缩后溶于水中，经乙酸乙酯萃取后，弃去乙酸乙酯提取液，水层继续用正丁醇萃取，正丁醇提取物上D-101大孔树脂柱，依次用水，30％和70％甲醇液洗脱，收集70％甲醇洗脱液，减压浓缩至干后，再经硅胶柱分离，依次用氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.1；3∶3∶0.1；3∶3∶1)洗脱，收集3∶3∶0.1洗脱液，蒸干溶剂后再经ODS(十八烷基硅烷键合硅胶)柱分离，以甲醇-水梯度洗脱，收集甲醇-水(2∶1)部分，再经ODS高效制备柱分离，获得该化合物(见参考文献1)。发明人前期获得该化合物的方法则是以20-60％乙醇回流提取2次，提取液减压浓缩至无醇味，高速离心或过滤，滤液上大孔树脂柱吸附后，依次用碱水、水、20％乙醇液、70％乙醇液洗脱至流出液无色，收集70％乙醇洗脱液，减压蒸干，即得总皂苷，该总皂苷再经Sephadex LH 20(交联葡聚糖凝胶)和ODS柱，氯仿-甲醇梯度洗脱即得。

上述制备方法步骤繁琐，费时，得率低，成本高，有毒溶剂用量较大，对环境易造成污染，产品易残留有机溶剂而不能充分保证产品的安全性，不适合工业化制备生产。

发明内容

本发明研究得到国家自然科学基金项目(项目号：30772770)和江苏省高技术项目(项目号：BG2007613)资助。

本发明公开了威灵仙皂苷AR的制备方法，大大简化了制备步骤，省时，得率高，成本低，有毒溶剂用量少，可以进行工业化生产。通过精制去除有毒溶剂残留，产品安全性得到保证，适合于从铁线莲属植物中工业化制备提取该化合物。

本发明制备威灵仙皂苷AR的方法如下：将威灵仙总皂苷用有机溶剂加热回流提取，提取液减压浓缩到总体积的1/10～6/10，浓缩液低温下放置，高速离心或过滤，离心或过滤得到的沉淀蒸干，即得威灵仙皂苷AR，所述有机溶剂选自甲醇、丙酮、异丙醇、乙醇中的一种或几种，有机溶剂浓度为大于70％。本发明中的百分比均为重量百分比。上述方法可以重复2～3次。