[发明专利]锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种锑化镉量子点CdTe免疫标记物的制备技术，尤其是具有信号放大功能的由CdTe和第二抗体Ab2共修饰的二氧化硅小球SiO₂免疫标记物的制备方法及其在生物分子检测中的应用。

背景技术

在肿瘤患者的治疗过程中，血清中肿瘤相关性蛋白质因子的灵敏、准确检测对于肿瘤治疗和愈后具有十分重要的意义。α-甲胎蛋白AFP是一种分子量约为70kDa的糖蛋白，通常在胎儿和新生儿的生长过程中由肝脏、卵黄囊和消化道排泄。AFP在健康的成人体内，其值低于25ng/mL。血清中AFP水平的增加被视为一些癌变的早期迹象，其中包括肝癌，卵黄囊肿瘤，由肝组织转移的胃癌，睾丸癌和鼻咽癌等。目前，通过酶联免疫吸附检测ELISA，表面等离子体共振，荧光免疫，化学发光，原子吸收光谱等检测手段在AFP抗原的检测中已有了一定的发展。但这些方法普遍存在灵敏度不高，且在疾病发展初期这些蛋白质的含量很低，用传统的方法难以检出等问题。因此，发展新的免疫检测方法，提高检测的灵敏度是目前临床诊断和疗效观察的迫切要求。

量子点，又称纳米晶，是一种由II-VI族或III-V族元素组成的纳米颗粒，其粒径一般介于1～10nm之间。基于量子效应，量子点在受激后可以发射荧光。与传统有机染料相比，量子点的优点在于荧光发射波长可控，激发光谱宽而连续、荧光光发射峰窄而对称、光稳定性好、耐光漂白、能实现一元激发多元发射，单一材料可以发射不同波段的荧光，因而在太阳能电池，发光器件，光学生物标记等领域具有广泛的应用前景。而单一量子点的元素含量及荧光强度受其本身颗粒大小和分散状态的制约并不利于观察。

发明内容

本发明的目的是为生物分子的超灵敏检测，提供一种工艺简单、成本低、且稳定性高的锑化镉量子点免疫标记物的制备及其生物分子超灵敏检测，实现低浓度生物分子的超灵敏电化学免疫检测。

本发明的技术方案为：一种锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，步骤为：

第一步，二氧化硅微球表面硅烷化：将粒径为200±3nm的纳米二氧化硅微球与3-氨基丙基三乙氧基硅烷室温下进行氨基硅烷化反应，得到氨基修饰的二氧化硅微球；具体就是将0.022g的纳米二氧化硅微球超声分散于2mL乙醇中，然后滴加0.4mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷，搅拌下反应6小时，离心分离、沉淀用乙醇洗涤得到氨基修饰的二氧化硅微球。

第二步，锑化镉量子点包裹二氧化硅微球的制备：将第一步处理得到的氨基修饰的二氧化硅微球和巯基丙酸覆盖的锑化镉量子点以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)反应，得到锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液；具体做法是第二步中，将第一步的氨基修饰的二氧化硅微球加入2mL浓度为5mg/mL的巯基丙酸覆盖的锑化镉量子点溶液中和1mL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液混合，在4℃下搅拌12小时，离心后蒸馏水洗涤稀释为2mL的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液。

第三步，制备锑化镉量子点免疫标记物：将第二步得到的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液与α-甲胎蛋白抗体溶液混合，在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下，进一步在锑化镉量子点表面修饰α-甲胎蛋白抗体，得到α-甲胎蛋白第二抗体与锑化镉量子点共修饰的二氧化硅微球，即锑化镉量子点免疫标记物(Si/QD/Ab2)。具体步骤为：将1mL锑化镉量子点包裹的二氧化硅微球悬浮液与1mL浓度为12μg/mL的α-甲胎蛋白抗体溶液混合，加入100μL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液和100μL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液中，4℃下静置24小时，离心分离，离心所得沉淀用二次蒸馏水配成1mL的悬浮液。

一种基于锑化镉量子点免疫标记物的电化学夹心免疫检测方法，步骤为：