[发明专利]锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法

权利要求书

1.一种锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，步骤为：

第一步，二氧化硅微球表面硅烷化：将粒径为200±3nm的纳米二氧化硅微球与3-氨基丙基三乙氧基硅烷室温下进行氨基硅烷化反应，得到氨基修饰的二氧化硅微球；

第二步，锑化镉量子点包裹二氧化硅微球的制备：将第一步处理得到的氨基修饰的二氧化硅微球和巯基丙酸修饰的锑化镉量子点以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐反应，得到锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液；

第三步，制备锑化镉量子点免疫标记物：将第二步得到的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液与α-甲胎蛋白抗体溶液混合，在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐和N-羟基琥珀酰亚胺的作用下，进一步在锑化镉量子点表面修饰α-甲胎蛋白抗体，得到α-甲胎蛋白第二抗体与锑化镉量子点共修饰的二氧化硅微球，即锑化镉量子点免疫标记物。

2.如权利要求1所述的锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，第一步中，将0.022g的纳米二氧化硅微球超声分散于2mL乙醇中，然后滴加0.4mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷，搅拌下反应6小时，离心分离、沉淀用乙醇洗涤得到氨基修饰的二氧化硅微球。

3.如权利要求1所述的锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，第二步中，将第一步的氨基修饰的二氧化硅微球加入2mL浓度为5mg/mL的巯基丙酸覆盖的锑化镉量子点溶液中和1mL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液混合，在4℃下搅拌12小时，离心后蒸馏水洗涤稀释为2mL的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液。

4.如权利要求1所述的锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，第三步，制备锑化镉量子点免疫标记物的具体步骤为：将1mL锑化镉量子点包裹的二氧化硅微球悬浮液与1mL浓度为12μg/mL的α-甲胎蛋白抗体溶液混合，加入100μL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液和100μL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液中，4℃下静置24小时，离心分离，离心所得沉淀用二次蒸馏水配成1mL的悬浮液。

5.一种基于权利要求1制备的锑化镉量子点免疫标记物的电化学夹心免疫检测方法，其特征在于，步骤为：

第一步，α-甲胎蛋白第一抗体修饰四氧化三铁磁性纳米微球的制备方法：利用3-氨基丙基三乙氧基硅烷与粒径为10±1nm的Fe₃O₄纳米颗粒表面的羟基反应，得到表面嫁接氨基基团的Fe₃O₄纳米颗粒，然后将表面嫁接氨基基团的Fe₃O₄纳米颗粒加入到戊二醛溶液中反应，反应结束后，利用外加磁场分离产物，清洗产物，然后将其加入到α-甲胎蛋白抗体中，得到α-甲胎蛋白第一抗体修饰的Fe₃O₄磁性纳米微球；

第二步，夹心免疫方法：将制得的α-甲胎蛋白第一抗体修饰的Fe₃O₄磁性纳米微球悬浮在一组含有不同浓度的α-甲胎蛋白抗原的待测溶液中，通过免疫反应捕获α-甲胎蛋白抗原，利用外加磁场将修饰有结合态α-甲胎蛋白抗原的Fe₃O₄磁性纳米微球分离、清洗后，加入到锑化镉量子点免疫标记物悬浮液中反应，得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe₃O₄磁性纳米微球，利用外加磁场分离、清洗得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe₃O₄磁性纳米微球；

第三步，锑化镉量子点免疫标记物的电化学测定：将第二步处理好的Fe₃O₄磁性纳米微球用质量浓度为0.05M的硫酸溶解后转入pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液中，利用阳极溶出伏安方法和铋膜修饰玻碳电极，检测溶解的Cd²⁺浓度，根据Cd²⁺阳极溶出峰电流与α-甲胎蛋白抗原浓度的关系，得到一条标准曲线，实现α-甲胎蛋白抗原的免疫检测。