[发明专利]比伐卢定的液相合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种20肽，具体说涉及比伐卢定的合成，尤其是比伐卢定的液相合成方法，属于多肽合成技术领域。

背景技术

比伐卢定(bivalirudin)是2000年12月美国食品药物管理局FDA批准上市的直接凝血酶抑制剂之一(商品名Angiomax，由Medicines制药公司出品)，它来源于水蛭素衍生物，是一种合成的含20个氨基酸的多肽，是凝血酶直接的、特异的、可逆性抑制剂。其相对分子质量为2180，氨基酸序列为：D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Ash-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tvr-Leu。

比伐卢定氨基端的D-Phe-Pro-Arg-Pro区域是与凝血酶活性点相互作用的位点，它可与游离型或与结合型凝血酶催化位点和底物识别位点发生特异性结合，从而直接抑制凝血酶的活性。因凝血酶可水解本品多肽顺序中Arg3和Pro4之间的肽键，使本品失活，所以比伐卢定对凝血酶的抑制作用是可逆而短暂的。比伐卢定与水蛭素相反，经肾排泄不是其主要的清除途径，它可能是被内源性多肽酶降解，可安全用于肾损害患者，肾功能正常时，比伐卢定的半衰期为25min。基于比伐卢定的以上特点与生物学活性，用比伐卢定作为防治血栓的药物有诸多优点：(1)专一性强，特异性直接抑制凝血酶活性，且对血栓结合的凝血酶也有抑制作用；(2)半衰期短，且对凝血酶的抑制作用是可逆性的，故而抗凝效果可以被预测，不需要实验室监测；(3)可安全用于肾损害患者。

比伐卢定在药理学上克服了肝素、低分子肝素及水蛭素的缺点，用于抗凝防栓安全有效。诸多临床试验研究表明，它可替代肝素安全、有效地用于冠状动脉血管成形术(PCI)、不稳定型心绞痛以及急性心肌梗死溶栓辅助治疗，尤其在肝素诱导的血小板减少症Hf的抗栓治疗中有独特的优势，且在外周动脉介入治疗PPI、心肺移植手术及肾功能不全患者防栓抗栓治疗中亦显示出良好的作用。因此，比伐卢定是一种有着很好临床应用前景的药物，目前已经被欧美和其它地区，如：加拿大、以色列、新西兰、阿根廷等国家批准，允许其上市。2005年全球销售1.5亿美元，2006年全球销售2.1亿美元，2007年全球销售2.55亿美元，其市场应用正在不断扩大。然而，比伐卢定在我国尚未上市，Medicines公司也没有在亚洲地区的上市计划，这在很大程度上延误了我国心血管医疗事业——尤其是冠状动脉血管成形术的发展。实现比伐卢定的规模化和产业化生产，能够很好地促进比伐卢定药物在我国医疗事业的应用，提高心脏手术的医疗水平。

比伐卢定作为一个很有合成难度的多肽药物，其高昂的合成成本限制了大规模生产和市场应用。目前，国内外尚无使用液相合成法制备比伐卢定的文献和专利报道。已有的主要研究论文及专利如下：

美国专利US5196404是比伐卢定的化合物专利，最早报导了比伐卢定的制备方法(1990年7月6日申请)，以BOC保护的氨基酸为原料，采用固相合成，最后用强刺激、剧毒的HF，在特殊的聚四氟乙烯装置中切肽树脂。此方法不适合规模化合成。隆萨股份公司于2006年3月4日申请的WO2006045503专利，与EP1737889、CN200580043573.1是同族专利，采用对酸不稳定的树脂，得到脱保护肽或部分保护肽，后者经纯化再脱保护得到目的肽。此法可以减少9位天冬酰胺变为天冬氨酸的副反应，能够得到纯度大于99％的目的肽。上海子能2006年3月10日申请的CN200610024611.5专利，名称为“固相多肽合成比伐卢定的制备方法”，系用Wang树脂或CTC树脂合成；Novetide公司2007年3月22日申请的WO2007033383专利，与EP1805204、US2007093423是同族专利，名称为Process forproduction of Bivalirudin，也是采用CTC树脂进行合成。

上述文献报道的比伐卢定的固相合成方法，需采用昂贵的特殊树脂和大过量的特殊保护氨基酸及缩合试剂，难以实现大规模合成，生产成本高。有的工艺需要用到剧毒的氟化氢，需要特殊的反应装置，也很难实现大规模生产。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术存在的上述问题，提供一种生产成本相对较低、适宜规模化生产的比伐卢定的液相合成方法。

本发明的技术解决方案是：

首先，用液相法逐步合成三个全保护片段，即：