[发明专利]具有抗肿瘤活性的灵芝子实体提取物及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及中药灵芝子实体提取物，具体地说是涉及一种具有抗肿瘤活 性的灵芝子实体提取物，以及这种具有抗肿瘤活性的灵芝子实体提取物的制 备方法。

背景技术：

灵芝为多孔菌科真菌，有几千年的药用历史，收载于中国最早的本草学 专著《神农本草经》。两千多年以来，人们一直用灵芝来预防、治疗肿瘤； 现代科学研究也表明，灵芝有较强的抗肿瘤作用。

灵芝三萜类成分被公认为灵芝抗肿瘤的有效成分之一。关于灵芝三萜类 成分的提取，常用乙醇加热回流提取，其存在有机溶剂残留多、提取温度高、 成本相对较高等缺点。超临界CO₂流体技术是提取灵芝三萜类成分的最新技 术，克服了以上缺点。中国专利200510047263.9公开了CO₂-SFE在提取灵芝 子实体中三萜类物质上的应用。

虽然目前关于灵芝子实体超临界CO₂萃取三萜类组分的提取工艺研究较 多，但对三萜类组分的纯化研究却相对较少，临床多以超临界CO₂萃取物直 接用药，或将纯化后的灵芝三萜酸类成分用于治疗。

李保明(参见：李保明，刘超，王洪庆，等.灵芝总三萜酸含量测定方法的研 究[J].中国中药杂志，2007，32(12)1234-1236.)报道将灵芝子实体用乙醇加热回 流提取，氯仿溶解，饱和碳酸氢钠溶液碱提，盐酸酸化，氯仿萃取的方法获 得灵芝三萜酸类成分；中国专利200310117112.7公开了一种灵芝三萜类抗肿 瘤组分的提取方法，它将灵芝子实体用甲醇或乙醇超声循环浸提，然后用饱 和碳酸氢钠溶液碱提，盐酸酸化，再用氯仿萃取将酸化后的三萜酸类成分， 减压蒸干得到三萜酸类组分。以上报道有一个共同之处，即均将饱和碳酸氢 钠溶液碱提之后的氯仿层弃掉，仅保留饱和碳酸氢钠溶液碱提液中的三萜酸 类成分，将之酸化并萃取出。

发明内容

本发明的目的，是提供一种具有抗肿瘤活性的灵芝子实体提取物，这是 一种从灵芝子实体超临界CO₂萃取物中获得的具有抗肿瘤活性的提取物。本 发明还提供这种具有抗肿瘤活性的灵芝子实体提取物的制备方法。本发明将 克服以往普遍使用灵芝三萜中三萜酸类成分，而忽略其中含有的其它具有抗 肿瘤活性成分利用的问题。

完成本申请第1个发明任务的方案是，一种具有抗肿瘤活性的灵芝子实 体提取物，其特征在于，其中三萜类成分的含量为30～70wt％；同时，该提 取物中含有的有效成分还用以下方法表征：用高效液相色谱条件1表征提取 物，由色谱峰保留时间在80～128min之间的成分组成(图1)；用高效液相 色谱条件2表征提取物，主要包含色谱峰保留时间为14.89～15.67min、 30.74～31.35min、34.36～34.98min、37.03～37.64min、39.47～40.01min的5 个成分(图2)。

所述的高效液相色谱条件1为：ZORBAX SB-C18柱(4.6mm×250mm， 5μm)；流动相：A：乙腈，B：0.05％磷酸水溶液，线性梯度洗脱，0min：27％A； 40min：27％A；60min：35％A；80min：45％A；90min：65％A；100min：75％A；110 min：85％A；120min：100％A；128min：100％A；流速：1.0mL·min-1；检测波长： 254nm；柱温：30℃。

在此条件下，灵芝子实体超临界CO₂萃取的粗提物由色谱峰保留时间在 0～128min之间的所有成分组成(图3)；该粗提物的碳酸氢钠萃取层(即以 往普遍使用的灵芝三萜酸类成分)由色谱峰保留时间在0～80min之间的所 有成分组成(图4)，色谱峰保留时间在80～128min之间的所有成分组成本提 取物。

高效液相色谱条件2为：ZORBAX SB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)； 流动相：A：乙腈，B：0.05％磷酸水溶液，线性梯度洗脱，0min：60％A；25 min：90％A；40min：100％A；45min：100％A；流速：1.0mL·min-1；检测波长： 240nm；柱温：30℃。

三萜类成分含量测定方法：用分光光度法，以熊果酸为对照品，在检测 波长为543nm下测定，供试品及空白样品的光谱扫描图见图5、图6、图7。