[发明专利]一种蓝藻藻蓝蛋白的富集分离方法

权利要求书

1.一种蓝藻藻蓝蛋白的富集分离方法，其特征在于步骤为：蓝藻破壁液的制备；JDN-3型树脂富集蓝藻破壁液中的藻蓝蛋白；洗脱分离藻蓝蛋白；JDN-3型树脂层析分离；洗脱液在脱盐后进行冷冻干燥，获得一定纯度的藻蓝蛋白；

(1)JDN-3型树脂制备：在容器中，放入氯甲基化聚苯乙烯树脂球即交联度10％的氯球和有机溶剂，氯球与有机溶剂的重量比为1∶8～15，通入氮气保护，分散溶胀2～12小时，在适当的搅拌下，加入多乙烯多胺，多乙烯多胺与氯球的重量比为2～12∶1，加入多乙烯多胺重量0.05％～0.1％的催化剂，加热到70℃～90℃，搅拌反应4～16小时，胺化后的树脂用甲醇、四氢呋喃、去离子水依次洗涤至中性，用质量浓度1％硝酸银溶液检测至洗涤后无氯离子存在，即得JDN-3型树脂；

所述有机溶剂选用N，N-二甲基甲酰胺、吡啶、1，4-二氧六环或四氢呋喃；

所述催化剂选用二氯化锡、氧化镁、三氯化铁或氯化钴；

(2)蓝藻破壁液的制备：采用水作提取剂，藻粉或鲜藻与水的固液质量比为1∶1～1∶10，搅拌均匀后，置于-10℃～-20℃下冷冻一定时间后，37℃融解，如此反复冻融4-6次；融化后的蓝藻破壁液4800-18000r/min离心10-30min，取上层清液；

(3)JDN-3型树脂富集蓝藻破壁液中的藻蓝蛋白：在容器中加入蓝藻破壁液和JDN-3型树脂，蓝藻破壁液中蛋白质浓度为10～35mg/mL，JDN-3型树脂在蓝藻破壁液中的重量体积百分浓度为5％～20％，密闭后，25～35℃下，在振荡器上振荡4～10小时，振荡器转速为100r/min，振荡结束后，经过抽滤，获得饱和吸附藻蓝蛋白的JDN-3型树脂；

(4)洗脱分离藻蓝蛋白：将步骤2中获得的饱和吸附藻蓝蛋白的JDN-3型树脂，用含0.1～0.5mol/L氯化钠的0.005～0.5mol/L的磷酸缓冲液多次洗涤，收集含藻蓝蛋白的洗脱液，透析脱盐后，真空浓缩获得浓缩液；

(5)JDN-3型树脂层析分离：采用湿法，将JDN-3型树脂加到层析柱内，使之自然沉降，直至达到所需的高度为止，将多余的液体放出，使液面刚好与柱床表面一致，步骤3中获得的浓缩液的加入量为床层体积的1/10；

待浓缩液中的蛋白被完全吸附后，用含0.1～0.5mol/L氯化钠的0.005～0.5mol/L的磷酸缓冲液梯度洗脱，控制流速在0.5～2mL/min，收集富含藻蓝蛋白的洗脱液段；

(6)透析脱盐、冷冻干燥：将收集的藻蓝蛋白洗脱液透析脱盐，最后冷冻干燥，得到纯度A₆₂₀/A₂₈₀＞2.2的高纯度藻蓝蛋白粉末。

2.根据权利要求1所述的蓝藻藻蓝蛋白的富集分离方法，其特征在于蓝藻的种类为蓝藻或螺旋藻干粉，或新鲜的螺旋藻，或取自野外的由多种微藻组成的太湖水水华蓝藻。