[发明专利]淡水芦苇非愈伤组织培养方法

说明书

一、技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域。

二、背景技术

芦苇(Phragmites australis)自然种群多发生在浅水性湿地，常见于池沼、河流沿岸、滩涂、河溪边多水地区。芦苇作为经济作物，苇秆可用于造纸和人造丝、编制芦席、草垫；生长期的芦苇含大量的蛋白质和糖分，为优良饲料；芦苇的叶、花、茎、根、笋均可入药。同时，芦苇具有重要的生态功能，保土固堤，消浪缓流，促淤防蚀等；近年来，芦苇耐污、去污，改善富营养化水质的能力备受重视，在湖滨带、河流坡岸与沼泽湿地恢复与重建中，芦苇成为了必选植物，被大面积种植。随着我国生态环境建设、水环境综合治理和湿地恢复工程的大量实施，芦苇的种苗与种源需求会愈来愈紧迫，而当前的技术将难以满足日益高涨的市场需要；因此，发明一种能够快速提供优质芦苇种苗的方法是必然的需要。

经中国专利网与相关论文网站检索，发现目前已有一些关于芦苇组织培养的报道，如吴国良等在《芦苇胚性愈伤组织的形成及植株的再生》中用种子通过愈伤培养获得完整植株，但愈伤的周期较长，过程较复杂；王希友在《芦苇胚性愈伤组织生长的研究》中只研究了愈伤组织的生长，并未长出完整植株；郭睿在《耐盐芦苇茎节组织体细胞胚发生及植株再生的研究》中也是通过愈伤组织培养来获得植株，同样存在周期较长的问题；另外，在杨印根等的专利《耐盐芦苇的无性繁殖方法》中，也描述了通过愈伤组织培养获得完整植株的过程，同样存在周期较长的问题。

三、发明内容

本发明需要解决的问题是：发明一种快速离体繁殖芦苇的方法，使得短期内可以获得大量优质同规格芦苇苗，满足湿地恢复与重建工程中的需要，促进环境的恢复。

本发明的技术方案是：

(1)野外选种，选择骆马湖长势高大的芦苇；

(2)消毒，将从野外取回的芦苇茎剪成小段，每段2-3cm长，在蒸馏水下洗净，然后在超净台上用70％乙醇浸泡30s，用蒸馏水涮洗2-3次，其后用0.1％HgCl₂水溶液消毒5min，再用无菌蒸馏水洗涤4-5次；

(3)将消毒后的芦苇的带芽原基的茎段接种到诱导培养基上诱导不定芽，诱导培养基中添加了聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、6-苄基腺嘌呤(BA)和萘乙酸(NAA)；温度为25土2℃、光强为2000lx、每日光照14h；培养7-23d，多数茎段的芽在两周左右可长到3cm；

(4)将产生的不定芽转移到继代培养基上进行继代培养，继代培养基中添加了PVP、BA和NAA；温度为25土2℃、光强为2000lx、每日光照14h条件下培养11-24d；

(5)当芽长到4-5cm时移到生根培养基上诱根，诱根培养基中添加了PVP、IBA和NAA；温度为25土2℃、光强为2000lx、每日光照14h；

(6)当试管苗根长至约2cm时，打开瓶口并加少量蒸馏水炼苗2-3d，然后将根部琼脂洗净，移入珍珠岩中过渡，3-5d后移入土壤。

各培养阶段的培养基配方(激素配比)如下表：

各阶段的培养基配方