[发明专利]抗肿瘤活性精制番荔枝总内酯及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物提取物，具体是涉及一种精制番荔枝总内酯和其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

番荔枝内酯是一类从番荔枝科植物中提取分离得到的天然化合物，番荔枝内酯类化合物具有广泛的生物活性，最典型的是杀虫和抗肿瘤细胞活性，研究显示番荔枝内酯在体内外具有强大的肿瘤细胞毒性，而且对多种肿瘤细胞都显示较好的生物活性，研究表明番荔枝内酯抗肿瘤活性的作用机理是通过阻断线立体NADH氧化还原酶，从而阻止呼吸链电子的传递，抑制肿瘤细胞ATP的生成，使肿瘤细胞因饥饿而死亡，其作用机制独特，不同于一般抗肿瘤药物的作用机制，被喻为“明日抗癌之星”。

现有技术中国发明专利(CN1739586A)公开了番荔枝粗提取物，中国发明专利(CN1224016A)公开了番荔枝总内酯，但现有技术中存在成分复杂，成分组成不明确，低活性成分含量高，难以控制药物的质量和药效。

本发明提供的精制番荔枝总内酯中主要成分史可莫辛(1)和番荔枝塔亭戊(2)的结构式分别如下所示：

发明内容

发明目的：本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种成分清楚，质量可控，由史可莫辛和番荔枝塔亭戊为主要成份的精制番荔枝总内酯和其制备的方法，本发明还有一个目的是提供该精制番荔枝总内酯在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术方案：本发明提供的精制番荔枝总内酯由番荔枝内酯史可莫辛和番荔枝塔亭戊为主要成份，其通过以下方法制得：取番荔枝的根、叶、树皮或种子粉碎后用石油醚、氯仿、乙酸乙酯其中之一或它们的混合溶剂渗漉，在低于60℃减压回收得到浓缩液、静置、离心、取离心所得上层液，加入1到10倍量的石油醚或石油醚和水的混合溶液，在50至85℃的水浴中加热溶解，吸取上层石油醚层，重复上面操作1到5次，合并石油醚溶液、浓缩、得浓缩物后，干燥，得到番荔枝总内酯，然后取番荔枝总内酯，进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯或氯仿-甲醇梯度洗脱，用薄层色谱跟踪，收集史可莫辛和番荔枝塔亭戊相应流分，浓缩干燥得到由史可莫辛和番荔枝塔亭戊为主要成份的精制番荔枝总内酯。

本发明提供的精制番荔枝总内酯中史可莫辛和番荔枝塔亭戊的重量百分含量为50％到90％。

本发明提供的精制番荔枝总内酯的制备方法，其包括以下步骤：

①取番荔枝植物的根、叶、树皮或种子去杂，粉碎后用石油醚、氯仿、乙酸乙酯其中之一或它们的混合溶剂渗漉后，在低于60℃减压回收得到浓缩液、静置、离心、得上层浓缩液；

②取步骤①离心所得上层液加入1到10倍量的石油醚或石油醚和水的混合溶液，然后在50至85℃的水浴中加热溶解，吸取上层石油醚层，重复上面操作1-5次，合并石油醚溶液，浓缩，得浓缩物后，干燥，得到番荔枝总内酯；

③取步骤②所得的番荔枝总内酯，进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯或氯仿-甲醇梯度洗脱，用薄层色谱跟踪，收集史可莫辛和番荔枝塔亭戊相应流分，浓缩干燥得到由史可莫辛和番荔枝塔亭戊为主要成份的精制番荔枝总内酯。

以上制备方法中步骤③所用的柱层析硅胶为100到300目，番荔枝总内酯与柱层析所用硅胶的重量比为1∶3到1∶6，洗脱剂石油醚-乙酸乙酯或氯仿-甲醇梯度洗脱比例为50∶1到2∶1。

上述硅胶薄层色谱跟踪所用的硅胶为硅胶G(CMC钠为粘合剂)，显色剂为碘蒸汽、碱性苦味酸试剂或kedde试剂即3，5-二硝基苯甲酸和氢氧化钠试剂，展开剂为石油醚-乙酸乙酯(9∶2)。

本发明制备精制番荔枝总内酯的另一种制备方法，其包括以下步骤：

①把番荔枝植物的根、叶、树皮或种子去杂，粉碎过20目后，用醇类(乙醇、甲醇、正丁醇、丙二醇或异丙醇)溶剂做夹带剂，采用超临界二氧化碳方法萃取，得到二氧化碳萃取液，在低于60℃减压回收得浓缩液；

②取步骤①所得的浓缩液加入1到10倍量的石油醚或石油醚和水的混合溶液，然后在50至85℃的水浴中加热溶解，吸取上层石油醚层，重复上面操作1-5次，合并石油醚溶液，浓缩，得浓缩物后，干燥，得到番荔枝总内酯；

③取步骤②所得的番荔枝总内酯，进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯或氯仿-甲醇梯度洗脱，用薄层色谱跟踪，收集史可莫辛和番荔枝塔亭戊相应流分，浓缩干燥得到由史可莫辛和番荔枝塔亭戊为主要成份的精制番荔枝总内酯。

以上制备方法中步骤①所用的夹带剂(乙醇、甲醇、正丁醇、丙二醇或异丙醇)的用量以毫升记为药材质量克的0％到50％，萃取温度为20℃到50℃，萃取压强为10Mpa到40Mpa，萃取时间为1到4小时。