[发明专利]一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法

权利要求书

1、一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法：其特征是：通过载体构建将MMLV-RT基因和肠激酶(enterokinase，EK)酶切位点克隆到pET28a载体中，在低温条件下通过与分子伴侣(TF，GroEL和GroES)共表达，来提高蛋白表达量和可溶性。

2、根据权利要求1所述的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：将MMLV-RT基因和肠激酶酶切位点克隆到pET28a载体中，在低温的条件下与分子伴侣共表达。

3、根据权利要求1所述的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：将MMLV-RT基因克隆到pET28a载体中实现共表达。

4、根据权利要求3所述的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：MMLV-RT肠激酶酶切位点克隆到pET28a载体中表达。

5、根据权利要求2所述的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：MMLV-RT基因在低温条件下与分子伴侣共表达。

6、根据权利要求2所述的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：原核表达载体表达的重组蛋白为His6-EK-MMLV-RT。

7、根据权利要求3和4所述的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：His6-EK-MMLV-RT与分子伴侣TF和GroEL-GroES在宿主菌中共表达。

8、根据权利要求6所述的的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：表达的融合蛋白含六个组氨酸(His6)标签，用镍亲和柱(Ni-NTA)纯化融合蛋白。

9、根据权利要求6和7所述的的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：先通过Ni-NTA纯化融合蛋白，再通过肠激酶酶切得到逆转录酶(MMLV-RT)。

10、根据权利要求7所述的一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法，其特征是：所述表达宿主菌是Escherichiacoli BL21(DE3)。