[发明专利]一种高密度乳酸细菌悬液的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于应用微生物领域，特别涉及一种高密度乳酸细菌悬液的制备 方法。

背景技术

乳酸细菌是动物益生菌中最具代表性的菌群，因此，在工业、农业、医 药、食品、饲料等与人类生活密切相关的重要领域应用价值很高。

在乳酸细菌的广泛应用中迫切的要求是能够获得高密度的乳酸细菌悬 液，目前采用的方法是菌体先经液体培养基培养后(其中乳酸细菌数量一般 为10⁸cfu/ml)，必须采用高速离心或微孔滤膜过滤的方法收集菌体(因为细 菌菌体很小，一般为0.几---几个um)，最后再将收集的菌体悬浮于液体中， 以获得高密度的菌悬液。而高速离心或微孔滤膜过滤的设备复杂昂贵、操作 要求高、使用成本高、应用受限。

目前获得微生物高密度悬液的方法主要是采用高速离心法和微孔滤膜过 滤法。其操作过程是先将菌体置于液体培养基中培养，待菌体数量增加至最 高时(一般为10⁸cfu/ml)，再将菌体以3500-10000r/min高速离心或以小于0. 几---几个um孔径的微孔滤膜过滤，收集菌体，再将收集的菌体洗涤，并悬 浮于液体中，以获得高密度的菌悬液。由于细菌菌体很小(一般为0.几--- 几个um)，收集菌体时必须采用高速离心或微孔滤膜过滤，其操作要求高、 设备复杂昂贵，使用成本高，应用受限。

微生物固定化技术及其应用已日渐成熟，目前，国内外有关乳酸菌固定 化方面的研究报道主要集中于载体选择、包埋方法优化、包埋后菌体的保存、 包埋菌体抗逆性、以及用包埋的菌体生产各类发酵产品的工艺技术等方面， 这些研究的关键不在于载体中的菌数能达到多高。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术不足，提供一种高密度乳酸细菌悬 液的制备方法，该方法制备高密度乳酸细菌悬液，简便、易行、设备要求低， 易规模化推广应用，市场前景广阔。

本发明的技术方案是这样实现的：

(1)菌种活化：将乳酸细菌以0.5-5ml/100ml的接种量接入MRS液体 培养基中，35℃-45℃培养12-24小时后，即得活化的乳酸细菌菌种；

(2)菌体包埋：将2-4g/100ml的海藻酸钠溶液，经118℃-121℃15-25min 灭菌后与上述活化的乳酸细菌菌种液以0.5-2∶1体积比混合，即得混合液， 然后滴加到已灭菌的0.1M CaCl₂溶液中，固化0.5-1小时后，即可形成包埋 好的乳酸菌载体颗粒，将此载体颗粒滤出，并用无菌水冲洗，即可得到包埋 好的直径2-3mm的球形乳酸菌载体颗粒。

(3)载体培养：将包埋好的直径2-3mm的球形乳酸菌载体颗粒，以6％ (g/100ml)的接种量接入到加有1％(g/100ml)CaCO₃的灭菌牛奶中，35 ℃-45℃100-150r/min培养12-24后，滤出载体，并用无菌水冲洗。

(4)菌体释放：将用无菌水冲洗后的载体置于0.5-2％(g/100ml)柠檬 酸钠溶液中，35℃-45℃100-150r/min 0.5-2小时后，即可获得高密度乳酸细 菌悬液(乳酸细菌数量可达10¹¹cfu/ml)。

本发明采用的方法是先将乳酸细菌包埋在海藻酸钙载体中；然后将此载 体置于含0.5-2g CaCO₃/100ml的牛奶中培养，让乳酸细菌在载体中生长繁殖 (载体中乳酸细菌数量可达10¹¹cfu/g)；最后将载体置于0.5-2g/100ml柠檬 酸钠溶液中，即可获得高密度乳酸细菌悬液(乳酸细菌数量可达10¹¹cfu/ml)。