[发明专利]特异性双链RNA结合蛋白嵌合体及其在病毒感染性疾病中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及双链RNA结合蛋白嵌合体在治疗或预防病毒感染性疾病中的应用，特别是涉及四 种由双链RNA感受器序列NF90、PACT、ADAR1和PKR组成的蛋白嵌合体在治疗和预防病毒感 染性疾病中的一种或多种应用。

背景技术

病毒感染是威胁人类生命健康的常见疾病。随着分子病毒学的发展，虽然对病毒感染的机制有 了深入的认识，但在临床上由于病毒种类繁多和诊断技术的限制，只有少部分病毒感染能得到确诊 和有针对性的治疗。一些严重的病毒感染，如艾滋、SARS、禽流感与Prion病毒感染(海绵样脑 病)等，目前缺乏特异性的治疗手段。因此，如能开发研究一种广谱的抗病毒药物，对拯救这部分 病人的生命，甚至如艾滋病等会很有价值。

双链RNA(dsRNA)是所有病毒复制过程的一个显著特征。一般来说，双链RNA在哺乳动物 细胞复制中不表达，只有在细胞感染病毒后才表达。所以，双链RNA是病毒感染哺乳细胞的分子 标记，它代表着病毒感染的一种早期危险信号。研究证实，人类和所有脊椎动物都存在针对双链 RNA的先天免疫系统。一般来说，超过30个碱基对的双链RNA就能有效的与其受体(双链RNA 结合蛋白，DRBP)作用，引起细胞的抗病毒反应。首先，双链RNA与分布在被激活的双链RNA 蛋白激酶(PKR)上的免疫反应性干扰素(IFN)效应蛋白作用，激活IFN介导的抗病毒通路，该 通路与PACT/RAX、TRBP、2′，5′寡腺苷酸合成酶、双链RNA特异的腺苷脱氨酶(ADAR)和核 因子90(NF90)等DRBP的作用有关。通过这个机制双链RNA能诱导快速抗病毒反应，导致蛋 白翻译抑制或凋亡。其次，细胞内双链RNA可与RNA解旋酶RIG-I和MDA-5结合，激活转录蛋 白如干扰素调节因子3(IRF3)和NF-κB等，这种激活作用对于RNA病毒诱导的干扰素的产生非 常关键。第三，细胞内和细胞外的双链RNA可与Toll样受体3(TLR3)结合，通过IRF3和NF-κB 激活IFN转录。总之，宿主细胞可通过一系列的DRBP在病毒感染早期侦测到细胞内外双链RNA 的存在，并通过不同的机制引起先天免疫应答。

虽然在进化过程中人类已形成了对细胞内、外双链RNA应答的先天免疫系统，但病毒也进化 出了一种回避双链RNA诱导的抗病毒反应的途径。为了存活病毒必须在被感染的宿主中成功复制。 研究证实，病毒已经进化形成了多种通路，用来抑制IFN的合成、结合并使分泌的IFN分子失活、 阻断IFN活化信号和破坏IFN诱导的抗病毒蛋白的作用。因为双链RNA是IFN反应的一个早期信 号，很多病毒已经进化能够编码其自身的DRBP以竞争宿主中的双链RNA受体，如流感病毒的 NS1、呼吸道肠道病毒的RS3和痘苗病毒的E3L能有效的竞争PKR或其它双链RNA受体，阻断 双链RNA诱导的IFN产生的抗病毒反应；腺病毒和EB病毒都可产生抑制性RNA分子，结合PKR 并使其失活。因此，无论宿主或病毒都可通过各种途径对双链RNA产生应答，揭示了双链RNA 介导的信号传导作用在病毒感染期间的重要性。由此推测双链RNA介导的信号应该是成功预防和 治疗病毒感染的首要目标。

发明内容

本发明的目的是提供一种将蛋白转导信号，双链RNA感受器和细胞凋亡信号通过DNA重组 的方法按以上顺序连接起来，组成特异性双链RNA结合蛋白嵌合体，并分别在原核和真核细胞中 表达的方法。

提供一种涉及四种不同双链RNA感受器的特异性双链RNA结合蛋白嵌合体。其中双链RNA 感受器可以分别是NF90，PACT，ADAR1或PKR中的任一种，可以是其部分或全部双链RNA结 合区域。

本发明的另一个目的是所述蛋白嵌合体用于制备抗病毒的药物。

本发明的再一个目的是特异性双链RNA蛋白嵌合体在治疗和预防病毒感染性疾病中的应用。

本发明的目的是这样实现的，特异性双链RNA结合蛋白嵌合体，其特征在于将蛋白转导信号， 双链RNA感受器和细胞凋亡信号通过DNA重组的方法按以上顺序连接起来，组成特异性双链RNA 结合蛋白嵌合体，并分别在原核和真核细胞中表达。

所述涉及四种不同双链RNA感受器的特异性双链RNA结合蛋白嵌合体，其中双链RNA感受 器可以分别是NF90，PACT，ADAR1或PKR中的任一种，可以是其部分或全部双链RNA结合区 域。