[发明专利]一种分离芫花条化学成分的方法

说明书

技术领域

本发明属于药用植物化学成分的分离，具体涉及一种分离芫花条化学成分的方法。

背景技术

芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc)为瑞香科植物，广泛分布于我国长江流域各省和黄河 流域的部分地区。芫花干燥的花蕾具有“泻水逐饮，解毒杀虫”之功^[1]。目前对芫花的研究 主要集中在干芫花花蕾和芫花根上，且分离所得主要是香豆素、芫花萜、黄酮类化合物。由 芫花枝条的提取物制备的“消络痛片(或胶囊)”用于治疗风湿性关节炎，临床使用多年且效 果较好，但其所含成分及活性成分并不清楚。

发明内容

本发明的目的是通过研究芫花枝条的主要成分，并希望从中能够得到药理活性较强的化 合物。

本发明是通过如下技术方案实施的：

研究一种分离芫花条化学成分的方法，其特征是用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花 (Daphne genkwa Sieb.et Zucc.)的枝条乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁 醇深度萃取，进行化学成分的分离，该方法分作如下步骤：

(1)制备芫花枝条乙醇提取物

重量比例：芫花枝条∶乙醇＝1∶1～2

干燥芫花枝条，常规净制、切段；乙醇含量为95±5％；

室温下渗漉法提取3～4次，合并渗漉液，50～55℃浓缩至稠膏状得浸膏；

(2)制备乙醇提取物的溶剂萃取物

将上述芫花枝条浸膏均匀混悬于水中，芫花枝条浸膏混悬液，先后分别用石油醚、乙酸 乙酯和水饱和的正丁醇萃取；

①石油醚萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶石油醚体积＝1∶10～14

每次萃取时，混悬液加配量的石油醚，室温下搅拌3h，分离萃取石油醚层；反复萃取3 次，合并石油醚萃取液；备用；

石油醚萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；环己烷-乙酸 乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷-乙酸乙酯在起始液和终止液中的浓度分别是：100％∶0％ →50％∶50％，得到I～XV共15个部分；

a.将第III部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温， 环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷-乙酸乙酯在起始液和终止液中的浓度分别 是：100％∶0％→50％∶50％，得到化合物1，3和4；

b.将第V部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，硅胶柱高45cm，柱径2.5cm，柱温 室温，环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷-乙酸乙酯在起始液和终止液中的浓 度分别是：100％∶0％→50％∶50％；

环己烷∶乙酸乙酯＝80％∶20％时，得到无色油状液体为化合物2；

环己烷∶乙酸乙酯＝75％∶25％时，根据极性的不同，依次得白色粉末为化合物5和6；

②乙酸乙酯萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶乙酸乙酯体积＝1∶6～10

每次萃取时，混悬液加配量的乙酸乙酯，室温下搅拌3h，分离萃取乙酸乙酯层，反复 萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液；备用；

乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；氯仿-甲醇 梯度洗脱，梯度范围，氯仿-甲醇在起始液和终止液中的浓度分别是：100％∶0％→85％∶15％；

氯仿∶甲醇＝100％∶85％时得到I～XX共20个部分；

a.将第II部分过小硅胶柱，小硅胶柱200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温， 以环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度范围，环己烷-丙酮在起始液和终止液中的浓度分别是： 100％∶0％→60％∶40％；

环己烷∶丙酮＝60％∶40％时，所得洗脱液经进一步Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行纯化， 经丙酮重结晶得化合物7；

b.将第IV部分过小硅胶柱，硅胶柱200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温， 以氯仿-甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿-甲醇在起始液和终止液中的浓度分别是：100％∶ 0％→85％∶15％；

氯仿∶甲醇＝90％∶10％时，洗脱部分析出晶体，经重结晶得化合物8；