[发明专利]一种分离芫花条化学成分的方法

权利要求书

1.一种分离芫花条化学成分的方法，其特征是用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花Daphne  genkwa Sieb.et Zucc.枝条的乙醇提取物经石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇深度萃取，进 行化学成分的分离，该方法分作如下步骤：

⑴制备芫花枝条乙醇提取物

重量比例：芫花枝条∶乙醇=1∶1～2

干燥芫花枝条，常规净制、切段；乙醇含量为95±5%；

室温下渗漉法提取3～4次,合并渗漉液，50～55℃浓缩至稠膏状得浸膏；

⑵制备乙醇提取物的溶剂萃取物

将上述芫花枝条浸膏均匀混悬于水中,芫花枝条浸膏混悬液，先后分别用石油醚、乙酸 乙酯和水饱和的正丁醇萃取；

①石油醚萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶石油醚体积=1∶10～14

每次萃取时，混悬液加配量的石油醚，室温下搅拌3h，分离萃取石油醚层；反复萃取3 次，合并石油醚萃取液；备用；

石油醚萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；环己烷—乙酸 乙酯梯度洗脱,梯度范围，环己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%，得到I～XV共15个 部分；

a.将第III部分过小硅胶柱，硅胶200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温，环 己烷—乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%,得到化合 物1，十八碳酸单甘油酯、化合物3，棕榈酸和化合物4，β-谷甾醇；

b.将第V部分过小硅胶柱，硅胶200～300目，硅胶柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室温,环 己烷—乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%；

环己烷∶乙酸乙酯=80%∶20%时,得到无色油状液体为化合物2，邻苯二甲酸二丁酯；

环己烷∶乙酸乙酯=75%∶25%时,根据极性的不同，依次得白色粉末为化合物5，咖啡 酸十八烷酯和化合物6，咖啡酸正二十烷酯；

②乙酸乙酯萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶乙酸乙酯体积=1∶6～10

每次萃取时，混悬液加配量的乙酸乙酯，室温下搅拌3h，分离萃取乙酸乙酯层，反复萃 取3次，合并乙酸乙酯萃取液；备用；

乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；氯仿—甲醇 梯度洗脱，梯度范围，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；得到I～XX共20个部分；

a.将第II部分过小硅胶柱，硅胶200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温，以环 己烷—丙酮梯度洗脱，梯度范围，环己烷—丙酮100%∶0%→60%∶40%；

环己烷∶丙酮=60%∶40%时，所得洗脱液经进一步Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行纯 化，经丙酮重结晶得化合物7，山奈酚；

b.将第IV部分过小硅胶柱，硅胶200～300目，柱径2.5cm，柱高45cm，柱温室温，以 氯仿—甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=90%∶10%时，洗脱部分析出晶体，经重结晶得化合物8，西瑞香素；

c.将第V部分过小硅胶柱，硅胶200～300目，硅胶柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室温, 氯仿—甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%时,将洗脱液浓缩，丙酮溶解，静置24h析出晶体得化合物10， 紫丁香树脂醇；

然后再用100%甲醇将第V部分全部洗脱下来，浓缩、丙酮溶解，静置24h，析出晶体为 化合物11，木犀草素；

d.将第X部分过小硅胶柱，硅胶200～300目，硅胶柱柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室 温,氯仿—甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=85%∶15%时，洗脱液析出晶体，经甲醇重结晶得化合物12，β-胡萝卜苷；

③水饱和的正丁醇萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶水饱和的正丁醇体积=1∶10～30；

每次萃取时，混悬液加芫花枝条浸膏9～10倍量水饱和的正丁醇，室温下搅拌3h；反复 萃取3次，合并水饱和的正丁醇萃取液；备用；

水饱和的正丁醇萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；氯仿 —甲醇梯度洗脱,梯度范围，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%，得到I～X 10个部分；

将第V部分过小硅胶柱，硅胶200～300目，硅胶柱柱高45cm，柱径2.5cm，柱温室温， 氯仿—甲醇梯度洗脱；梯度范围，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%时，得化合物13，刺五加苷B；

氯仿∶甲醇=90%∶10%时，得化合物14，松脂醇二葡萄糖苷；

氯仿∶甲醇=92%∶8%时，得化合物15，二氢刺五加苷B。

1.一种分离芫花条化学成分的方法，其特征是用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花Daphne  genkwa Sieb.et Zucc.枝条的乙醇提取物经石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇深度萃取，进 行化学成分的分离，该方法分作如下步骤：

⑴制备芫花枝条乙醇提取物

重量比例：芫花枝条∶乙醇=1∶1～2

干燥芫花枝条，常规净制、切段；乙醇含量为95±5%；

室温下渗漉法提取3～4次,合并渗漉液，50～55℃浓缩至稠膏状得浸膏；

⑵制备乙醇提取物的溶剂萃取物

将上述芫花枝条浸膏均匀混悬于水中,芫花枝条浸膏混悬液，先后分别用石油醚、乙酸 乙酯和水饱和的正丁醇萃取；

①石油醚萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶石油醚体积=1∶10～14

每次萃取时，混悬液加配量的石油醚，室温下搅拌3h，分离萃取石油醚层；反复萃取3 次，合并石油醚萃取液；备用；

石油醚萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；环己烷—乙酸 乙酯梯度洗脱,梯度范围，环己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%，得到I～XV共15个 部分；

己烷—乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%,得到化合 物1，十八碳酸单甘油酯、化合物3，棕榈酸和化合物4，β-谷甾醇；

己烷—乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%；

环己烷∶乙酸乙酯=80%∶20%时,得到无色油状液体为化合物2，邻苯二甲酸二丁酯；

环己烷∶乙酸乙酯=75%∶25%时,根据极性的不同，依次得白色粉末为化合物5，咖啡 酸十八烷酯和化合物6，咖啡酸正二十烷酯；

②乙酸乙酯萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶乙酸乙酯体积=1∶6～10

每次萃取时，混悬液加配量的乙酸乙酯，室温下搅拌3h，分离萃取乙酸乙酯层，反复萃 取3次，合并乙酸乙酯萃取液；备用；

乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；氯仿—甲醇 化，经丙酮重结晶得化合物7，山奈酚；

氯仿—甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=90%∶10%时，洗脱部分析出晶体，经重结晶得化合物8，西瑞香素；

氯仿—甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%时,将洗脱液浓缩，丙酮溶解，静置24h析出晶体得化合物10， 紫丁香树脂醇；

然后再用100%甲醇将第V部分全部洗脱下来，浓缩、丙酮溶解，静置24h，析出晶体为 化合物11，木犀草素；

温,氯仿—甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=85%∶15%时，洗脱液析出晶体，经甲醇重结晶得化合物12，β-胡萝卜苷；

③水饱和的正丁醇萃取

配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶水饱和的正丁醇体积=1∶10～30；

每次萃取时，混悬液加芫花枝条浸膏9～10倍量水饱和的正丁醇，室温下搅拌3h；反复 萃取3次，合并水饱和的正丁醇萃取液；备用；

水饱和的正丁醇萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高120cm，柱径10cm，柱温室温；氯仿 —甲醇梯度洗脱,梯度范围，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%，得到I～X 10个部分；

氯仿—甲醇梯度洗脱；梯度范围，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%时，得化合物13，刺五加苷B；

氯仿∶甲醇=90%∶10%时，得化合物14，松脂醇二葡萄糖苷；