[发明专利]人工活体冷冻提取组织超微结构及其蛋白分布标本的方法

权利要求书

1.人工活体冷冻提取组织超微结构及其蛋白分布标本的方法，其特征在于采用如下步骤：

(1)、在待取标本活体状态下，人工迅速将异戊烷-丙烷混合冷冻剂，直接倾倒在提取标本的活体器官表面上；

(2)、然后将液态氮浸泡在标本表面，并在液态氮中手工修剪组织结构标本；

(3)、将提取后的组织结构标本置入多聚甲醛和制备原料纯度为99.5-99.7％丙酮，经过提纯的冷冻置换液中；同时，用棉絮状固态二氧化碳结合丙酮进行保温，在-80℃环境下进行缓慢冷冻置换48-72小时，并维持冷冻置换温度恒定；然后阶梯升温，冷冻置换过程缓慢持续地进行；

(4)、冷冻置换过程数次重复进行，直至标本组织细胞的水分子全部置换完为止。

2.根据权利要求1人工活体冷冻提取组织超微结构及其蛋白分布标本的方法，其特征在于冷冻置换液的制备过程：多聚甲醛和丙酮混合液需先在60-70℃条件下溶解多聚甲醛于双蒸水中制成20％多聚甲醛溶液，然后用纯度为99.5-99.7％丙酮稀释；为达到冷冻置换液的高纯度，吸出置换液中残留水分子，需在其中加入分子筛吸收水分子，并进行分子筛更换，直到冷冻置换液中无水分子存在为止，制成多聚甲醛和丙酮混合的冷冻置换液，其中多聚甲醛的终浓度达到2％。

3.根据权利要求1人工活体冷冻提取组织超微结构及其蛋白分布标本的方法，其特征在于采用增加更换冷冻置换液次数的方法，完全置换出组织细胞中的水分子。

4.根据权利要求1或2人工活体冷冻提取组织超微结构及其蛋白分布标本的方法，其特征在于采用纯度为99.5-99.7％的丙酮，需分别更换3-6次分子筛来吸收水分子。