[发明专利]食品中金黄色葡萄球菌毒素基因的检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1、食品中金黄色葡萄球菌毒素基因的检测试剂盒，其特征在于包括检测溶液A和检测溶液B：

检测溶液A中含10mM Tris·Cl、50mM KCl、25mM MgCl₂、dNTP各2.5mM、Taq DNA聚合酶5U/μL及ETA、SEB、SEC、SEE、SEI和SEA六种毒素基因引物对各10μM；

检测溶液B中含10mM Tris·Cl、50mM KCl、25mM MgCl₂、dNTP各2.5mM、Taq DNA聚合酶5U/μL及SEJ、ETB、TSST、SED、SEH和SEG六种毒素基因引物对各10μM；

其中，检测溶液A中6种毒素基因的特异性引物序列如下：

检测溶液B中6种毒素基因的特异性引物序列如下：

2、食品中金黄色葡萄球菌毒素基因的检测方法，其特征在于使用权利要求1所述的试剂盒，包括如下步骤：

①PCR反应：取1ul待测样品DNA溶液，加入10ul试剂盒中的检测溶液A和14ul灭菌超纯水，总体积25ul；另取1ul待测样品DNA溶液，加入10ul试剂盒中的检测溶液B和14ul灭菌超纯水，总体积25ul；两个反应体积分别在5000r/min离心10s，然后按下列参数进行PCR扩增：

预变性：94℃，3min；

进入循环：94℃变性60s，60℃退火60s，72℃延伸60s，35次循环；

终止延伸：72℃，7min；

②将PCR扩增产物进行DHPLC分析：

色谱柱：PS-DVB & C18 DNASep色谱柱，4.6mm×50mm，粒度3μm；

柱温：50℃；

流动相(体积比)：0.0min，55.0％缓冲溶液A，45.0％缓冲溶液B；

                0.5min，50.2％缓冲溶液A，49.8％缓冲溶液B；

                2.8min，40.9％缓冲溶液A，59.1％缓冲溶液B；

                5.0min，37.3％缓冲溶液A，62.7％缓冲溶液B；

7.3min，35.5％缓冲溶液A，64.5％缓冲溶液B；

9.5min，34.3％缓冲溶液A，65.7％缓冲溶液B；

其中，缓冲溶液A是浓度0.1mM的TEAA水溶液；缓冲溶液B是浓度为0.1M TEAA水溶液与乙腈按体积比3∶1的混合溶液；

流速：0.9mL/min；

检测器：荧光检测器，光源：150W Xenon灯；激发谱带宽：15nm；发射谱带宽：15.3nm；检测灵敏度：在波长350nm积分2s；

上样量：PCR产物5μL。