[发明专利]用于快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品微生物安全监测领域，具体地说，涉及用于快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其检测方法。

背景技术

食品是人类赖以生存的物质基础，食品安全是关系人类健康和社会发展的重大问题。近年来，国内外食品安全的恶性事件不断发生，其中食源性致病菌是食品安全事故的重要原因。食源性致病菌是指以食物为载体，导致人类发生疾病的一大类细菌。全世界每年约有220万人因食源性致病菌而丧生，而且食源性疾病常常是发展中国家导致人非正常死亡的主要原因。因此，食源性致病菌的控制已成为国内外普遍关心的问题。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，以下简称“金葡菌”)为常见的革兰氏阳性球菌，分布极为广泛，可以附着于尘埃、物体表面、皮肤、粘膜等等，容易通过空气和接触传播，并且有较强的抗逆性。金葡菌致病力强，由它产生的耐热肠毒素引起的食物中毒时有发生，其危害仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。同时金葡菌也是引起人类感染最常见的病原菌之一，而且近年临床分离的金葡菌几乎都为难以抑制的耐药株，因此金葡菌感染已与肝炎、爱滋病一起并称为世界上三大难治传染性顽症。所以对食品、药品和卫生用品中金葡菌的检验以及临床金葡菌的准确诊断是保证人类健康的必要手段；大部分国家对食品、医疗用品等的金葡菌指标都有严格规定。

有效控制金葡菌需要准确及时的检测手段。目前国标法检测金葡菌需要接种Baird-Parker平板，培养后挑取可疑菌落接种血平板，对溶血的菌落再进行包括革兰氏染色、镜检以及凝固酶试验等的确认试验。此方法检验总时间大约需要52h或以上，而且确认试验通常需要大量的时间、精力和费用，特别是检测大通量和杂菌污染较为严重的样品时，此缺点更为突出。

显色培养基是对传统检测手段的一个突破，它利用显色底物检测目标微生物的特征性酶，使目标微生物菌落显出特定的颜色，而干扰菌被抑制，或不产生特征性酶而不显色，因而能被区别。当显色培养基上生长菌落之后只要通过简单的菌落颜色形态观察或简单试验就可以进行鉴别。

显色培养基与传统培养基相比有巨大的优势。首先它具有较高的灵敏度，在培养之前不需要增菌；而且由于其特异性较高，假阳性机率比传统的培养基低，因而能大大减少确认试验的量，节省大量人力、财力和时间；而且检测者不需要太多的专业知识，只要有基本的微生物操作技术和辨色能力就可进行检测。第二，在挑取传统培养基上的疑似菌落进行确认试验过程中，可能受到杂菌菌落的形态和数量、检测者经验和因费用不足确认试验数量被限制，疑似菌落不能被全检等等不稳定因素的影响，使检测结果存在假阴性的风险。显色培养基对生长的菌落都已完成特征性酶的测试，能大大减少以上因素造成误差的机会，提高检测的准确率。第三，传统培养基一般采用选择性培养后再进行平板检测，只能进行定性的检测。而使用显色培养基能够直接通过计数平板上阳性菌落而对样品中金葡菌的数量进行定量检测。金葡菌的定量检测对食品在生产、保存和运输过程的安全性评估和其含有金葡菌耐热肠毒素的风险评估都有重要意义。

目前法国CHROMager公司、BioMerieux公司、美国3M公司已开发出金葡菌显色培养基，但这些进口显色培养基价格昂贵，购买不便，导致检测成本高，国内一般基层单位和企业很少采用。

发明内容

本发明的目的在于针对传统方法的不足，提供一种特异性高、检测周期短、检测成本低、可操作性强，适用于检测大通量样品的金黄色葡萄球菌的试剂及其检测方法。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

用于快速检测金黄色葡萄球菌的试剂，所述试剂包括：

1)PEN培养基

所述PEN培养基由PEN基础培养基和PEN增补剂组成；

所述PEN基础培养基由以下组分组成：牛肉浸粉1～5g/L、胰蛋白胨5～10g/L、大豆蛋白胨5～10g/L、丙酮酸钠3～7g/L、氯化钠3～10g/L、琼脂15g/L；

所述PEN增补剂由以下组分组成：多黏菌素B 15～30mg、奈啶酮酸5～15mg、50wt％卵黄-生理盐水溶液10～20mL，冻干血浆25～40g，无菌去离子水25～40mL；

2)TCF显色片