[发明专利]蜱体内检测莱姆病病原的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.蜱体内检测莱姆病病原的检测方法，其特征是以16S rRNA基因为靶基因，用专用软件设计出用环介导的恒温扩增技术用于蜱体内检测莱姆病病原伯氏疏螺旋体的引物，再从中选出莱姆病病原特异性区段的引物，将侍检蜱刺破后提取DNA，将所得DNA与反应缓冲液、所选出的特异性区段的引物反应混合物及DNA聚合酶混匀，进行扩增，扩增产物灭活后加入上样缓冲液，再置于含溴化乙锭的琼脂糖凝胶中，进行电泳检测，根据电泳后是否出现特定条带后即可得出被检蜱是否带有莱姆病病原。

2.根据权利要求1所述的蜱体内检测莱姆病病原的检测方法，其特征是所用的上样缓冲液为：质量/体积比为0.25％的溴酚蓝，质量/体积比为0.25％的二甲苯青，质量/体积比为40％的蔗糖水溶液，所用的含溴化乙锭的琼脂糖凝胶为由0.04M Tris-乙酸和0.001M EDTA组成的TAE缓冲液配制的其中含0.5ug/mL的溴化乙锭质量/体积比为2％琼脂糖。

3.根据权利要求1或2所述的蜱体内检测莱姆病病原的检测方法，其特征是所用的莱姆病病原特异性引物为：

正向外部上游引物F3：5’-ttccccgtttggggtcta-3’

反向外部下游引物B3：5’-gggccatgatgatttgacgt-3’

正向内部引物FIP：5’-cgttgcgggacttaacccaacattttatacaggtgctgcatggttg-3’

反向内部引物BIP：5’-accagcatgtaatggtggggactttttcctcaccttcctccgac-3’

4.一种用于实现权利要求1或2或3所述的检测方法的试剂盒，其特征是试剂盒内有：

a.标准伯氏疏螺旋体阳性基因组DNA；

b.标准伯氏疏螺旋体阴性蜱基因组DNA；

c.LAMP反应缓冲液；

d.DNA聚合酶；

e.特异引物混合物。