[发明专利]一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法无效
| 申请号： | 200910000836.0 | 申请日： | 2009-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN101781649A | 公开（公告）日： | 2010-07-21 |
| 发明（设计）人： | 邱德有;刘敏;李凤岚 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院林业研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/82;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N30/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100091*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 微小 rna 高效 抑制 红豆杉 细胞 合成 14 氧化 紫杉 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用微小RNA前体高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法，其 特征在于，它包括以下步骤：
(1)从水稻基因组DNA中克隆得到miRNA415前体；
(2)构建载体，载体宿主菌为根癌农杆菌；
(3)农杆菌浸泡法转化红豆杉悬浮细胞；
(4)筛选转基因细胞；
(5)sinenxan A、sinenxan C和Yunnanxane这3种C-14氧取代的紫杉烷含量分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其中载体质粒为pEGAD，含有绿色荧光基因。
3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(3)包括：
(1)将活化的含有目的载体的根癌农杆菌菌液，稀释至OD值0.5-0.6；
(2)取对数生长期的红豆杉愈伤组织悬浮培养一天后与农杆菌共培养2-3天；
(3)用含头孢霉素的液体培养基清洗转化的愈伤组织；
(4)两周后转至含有头孢霉素的培养基。
4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于：红豆杉悬浮细胞生长和转化所采用的培 养基为6，7-V培养基。
5.根据权利要求1所述方法，其中sinenxan A、sinenxan C和Yunnanxane这3种C-14氧取 代的紫杉烷含量采用HPLC方法分析。
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