[发明专利]乳酸脱氢酶表达盒、转化酵母和乳酸的制造方法

权利要求书

1.乳酸脱氢酶表达盒，所述乳酸脱氢酶表达盒是在启动子下游连接了编码乳酸脱氢酶的基因的乳酸脱氢酶表达盒，所述启动子是在一边用分离膜过滤具有乳酸生产能力的酵母一边进行连续培养中，培养开始后50小时之后基因表达量为全部基因平均相对表达量的5倍以上的基因的启动子。

2.权利要求1所述的乳酸脱氢酶表达盒，所述启动子是指数缺陷的抑制1基因(SED1基因)、细胞壁关联蛋白质2基因(CWP2基因)或烯醇化酶1基因(ENO1基因)的启动子。

3.权利要求1所述的乳酸脱氢酶表达盒，所述启动子为包含选自以下(a)～(c)的碱基序列的启动子，

(a)包含序列号1～3任一项所示的碱基序列的启动子；

(b)包含与含有序列号1～3任一项所示的碱基序列或其一部分的碱基序列在严格条件下杂交的碱基序列的启动子；

(c)包含在序列号1～3任一项所示的碱基序列中缺失、替代和/或添加了1个或多个碱基的碱基序列的启动子。

4.乳酸脱氢酶表达盒，其包含选自以下(a)组的启动子和选自以下(b)组的编码乳酸脱氢酶的基因，

(a)

(1)包含序列号1～3任一项所示的碱基序列的启动子；

(2)包含与含有序列号1～3任一项所示的碱基序列或其一部分的碱基序列在严格条件下杂交的碱基序列的启动子；

(3)包含在序列号1～3任一项所示的碱基序列中缺失、替代和/或添加了1个或多个碱基的碱基序列的启动子；

(b)

(1)包含序列号4～6任一项所示碱基序列的编码乳酸脱氢酶的基因；

(2)包含与含有序列号4～6任一项所示的碱基序列或其一部分的碱基序列在严格条件下杂交的碱基序列的编码乳酸脱氢酶的基因；

(3)包含在序列号4～6任一项所示的碱基序列中缺失、替代和/或添加了1个或多个碱基的碱基序列的编码乳酸脱氢酶的基因。

5.转化酵母，在染色体中具有至少一个权利要求1～4任一项中所述的乳酸脱氢酶表达盒。

6.权利要求5所述的转化酵母，所述转化酵母的选自指数缺陷的抑制1基因(SED1基因)、细胞壁关联蛋白质2基因(CWP2基因)和烯醇化酶1基因(ENO1基因)的至少一个基因被权利要求1～4任一项中所述的乳酸脱氢酶表达盒替代。

7.权利要求5或6所述的转化酵母，所述转化酵母属于酵母属(Genus Saccharomyces)。

8.权利要求5或6所述的转化酵母，所述转化酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

9.乳酸的制造方法，包括培养权利要求5～8任一项中所述的转化酵母的培养步骤。

10.权利要求9所述的乳酸的制造方法，所述培养步骤是用分离膜过滤培养液、从滤液中回收乳酸、再将未滤过液保持在或返流到培养液中，并且在培养液中追加培养基的连续发酵。