[发明专利]蓝舌病毒疫苗和免疫原性组合物、使用方法及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于使反刍动物对蓝舌病毒(BTV)的致病毒株或血清型免疫的疫苗或免疫原性组合物，以及涉及制备该疫苗和用这些组合物免疫反刍动物的方法。

背景技术

蓝舌(Blue tongue)为节肢动物传播的病毒疾病，发生在牛、绵羊、山羊和野生反刍动物中。感染的动物中的蓝舌损伤类似感染性牛病毒腹泻，水泡性口炎病毒，恶性卡他热，鹅口疮，牛瘟，光敏作用和口蹄疫。已将蓝舌病毒(BTV)看作牛的积水性无脑以及牛和绵羊的不育、流产和有缺陷的幼崽出生(birth of defective young)的原因。在文献中报道了24种血清型能引起问题，范围从隐性感染到急性烈性感染。也已识别了使牛脱毛(shedding)的慢性、持续性病毒。有BTV可呈现屠宰牲畜的身体状况和销售的明显下降。在BTV-感染的绵羊中，羊毛生长可被产生有缺陷的或低产羊毛的羊毛破损的发展而损害。BTV感染后显著的虚弱可导致对于继发性细菌或衣原体感染和其它捕食因素的抗性降低。感染的动物的生殖效率也被不利地影响。

在感染的动物中观察到流产和有缺陷的后代，且一些动物会在一个或多个生育季节不育。蓝舌感染造成的最显著的损害为禁运和严厉的测试要求导致的经济损失，该禁运和严厉的测试要求强加于从蓝舌病区出口牛、牛精液和绵羊的生产者。

在自然条件下，病毒的传递通过至少四种库蠓(Culicoides)属的叮咬而发生，例如，白蛉，蠓(midges)。BTV通过相同库蠓载体在牛和绵羊之间的生物传递已通过实验证实(Luedke等人，28AJVR 457(1967))。牛、绵羊以及许多种类的野生反刍动物可作为BTV的储库，为病毒过冬提供了手段。持久的BTV病毒血，可持续长达三年，已在牛中辨别(Hourrigan，51 Aust Vet J170(1975))。一旦BTV在一个国家确认，该病毒实际上不可能根除(Erasmus，51Aust Vet J 209)。蓝舌的病原体(etiologic agent)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)家族，环状病毒属(Orbivirus)。

蓝舌的病毒病原学由Theiler在1906建立，(Erasmus，51Aust V et J 165(1975))。从那以后文献中出现多个报道，它们(a)证实蓝舌病毒从牛、绵羊、山羊和许多野生反刍动物分离，和(b)蓝舌疾病的临床和病理特征，和(c)描述不同BTV血清型产生的感染。例如，参见Onderstepoort(J Vet Sci AnimIndus 7(1944)；Komarov和Goldsmit，Refuah Vet 96(1951)；Price和Hardy，124J Am Med Assn 255(1954)；Shope等人，111 J Exp Med 155(1960)；Livingston和Hardy，25 AJVR 1958(1964)；Luedke等人30 AJVR 511(1969)；Hourrigan等人，51 Aust Vet J 170(1975)，在美国蓝舌的免疫控制首先由McKercher等人尝试，118 AJVR 310(1975)，且BTV国际血清型10疫苗生长在受精的鸡蛋中。该产物模仿Alexander，(J V et Sci Indus 231(1947))，其首先在鸡胚中成功繁殖蓝舌病毒。

早期接种方案常规地在南非和以色列进行，其使用包含大量蓝舌毒株的蛋减毒(egg-attenuated)多价活病毒疫苗。由Cutter实验室制备且在美国使用的蛋改造的疫苗已禁止销售，因为在接种的绵羊中有严重的反应。随后，Kemeny和Drehle，22 AJVR 921(1961)，将BTV国际类型10从蛋改造为牛肾细胞培养物。该由Colorado Serum Company制备的改造的活病毒疫苗在美国用于绵羊。

需要改善用于使反刍动物(特别是，绵羊和羔羊)对蓝舌病毒免疫的疫苗的开发。本发明解决了该需求。本文引用的任何文献不应被认为是承认该文献可作为本发明的现有技术。

发明内容

根据本发明，已发现蓝舌病毒可使用本文所述的方法两次灭活，且这些两次灭活的病毒可用于制备疫苗和免疫原性组合物，该疫苗和免疫原性组合物用于使反刍动物对BTV的各种毒株和病原性血清型产生免疫。而且，已确定佐剂和赋形剂的具体组合有效用于本发明的组合物以在给药所述组合物的反刍动物中诱发有效的免疫应答。