[发明专利]合酶抑制剂筛选方法

权利要求书

1.用于选择至少一种分泌一种或多种目的活性酶的宿主细胞的方法，所述方法包括如下步骤：

a)提供包含一种或多种合酶抑制剂的生长培养基，该抑制剂抑制所述宿主细胞中至少一种必需化合物的合成，并且进一步包括一种或多种组分，其在存在所述一种或多种目的活性酶的情况下可转化为至少一种必需化合物，从而允许所述宿主细胞生长；

b)在步骤(a)的生长培养基中或其上培养所述宿主细胞；和

c)选择能在步骤(a)的生长培养基中或其上生长的至少一种宿主细胞，所述宿主细胞分泌一种或多种目的活性酶。

2.权利要求1的方法，其中将所述宿主细胞转化；优选用多核苷酸构建体转化所述宿主细胞，所述构建体包含编码一种或多种目的酶的至少一个多核苷酸。

3.权利要求1或2的方法，其中所述宿主细胞是微生物的宿主细胞。

4.权利要求3的方法，其中所述宿主细胞是原核的，优选所述宿主细胞是革兰氏阳性的，更优选所述宿主细胞是芽孢杆菌属(Bacillus)细胞，并且最优选所述宿主细胞是嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。

5.权利要求3的方法，其中所述宿主细胞是真核的，优选所述宿主细胞是酵母细胞，更优选所述宿主细胞是酵母属(Saccharomyces)细胞，并且最优选所述宿主细胞是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述一种或多种目的活性酶为异源的或同源的。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述一种或多种目的活性酶包括氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶和/或连接酶；优选所述一种或多种目的活性酶包括脂肪酶和/或蛋白酶。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述一种或多种合酶抑制剂包括可抑制至少一种氨基酸和/或至少一种脂肪酸的合成的抑制剂。

9.权利要求8的方法，其中所述一种或多种合酶抑制剂包括5-硝基-2-苯并咪唑啉酮、草甘膦、羧基甲氧基羟胺、羧基甲氧基胺、O-烯丙基羟胺、吲哚丙烯酸、O-(羧基甲基)羟胺半盐酸盐、咪唑啉酮或磺酰脲。

10.权利要求8的方法，其中所述一种或多种合酶抑制剂包括可抑制甲硫氨酸合成的抑制剂，优选所述一种或多种合酶抑制剂包括羧基甲氧基羟胺。

11.权利要求8的方法，其中所述一种或多种合酶抑制剂包括三氯生、浅蓝菌素、硫乳霉素或diazaborin。

12.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述一种或多种合酶抑制剂包括可抑制葡萄糖-6-磷酸酶的抑制剂，优选所述一种或多种合酶抑制剂包括根皮素、磷酸吡哆醛、theilavin A、2-羟基-5-硝基苯甲醛或木白斯他汀(Mumbaistatin)。

13.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述一种或多种合酶抑制剂包括可抑制葡糖胺-6P合酶的抑制剂，优选所述一种或多种合酶抑制剂包括氨基连三唑或aptamine。

14.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述一种或多种合酶抑制剂包括可抑制果糖1，6二磷酸酶的抑制剂，优选所述一种或多种合酶抑制剂包括2，3-二氢-1H-环戊[b]喹啉。