[发明专利]用于皮肤伤口无疤痕愈合的多靶标RNAi治疗

说明书

发明涉及领域

本发明是关于皮肤伤口或其他皮肤疾病，如银屑病、系统性红斑狼疮引起的皮肤损伤的组合物和方法，其中使用的方法是针对多个致病基因的寡聚核苷酸序列的小干扰RNA(siRNA)“鸡尾酒”。

本应用享有2007年11月6日申请的、美国临时申请号为60/985,820的专利的优先权，本发明引用此专利以保持系统性和完整性。

背景

皮肤是机体最大的器官，由下层的内皮层(真皮)和外部的上皮层(表皮)组成，皮肤的基本功能是作为对外界环境的保护屏障。由于受伤或疾病使大面积皮肤散失完整性后，可能引起主要功能散失甚至死亡。在美国，每年有超过125万烧伤患者和650万因挤压、静脉淤滞或糖尿病引起的慢性皮肤溃疡患者。伤口治疗的首要目标是快速的愈合并恢复功能，同时尽量减少疤痕面积、恢复美观(1)。近期细胞和分子生物学发展迅猛，极大增强了我们对伤口修复和组织再生的生物学过程的理解，也提升了伤口护理的水平(2)。

伤口修复：皮肤损伤的快速反应

受伤后恢复组织完整性的过程，是一个系统发育过程中形成的基本而重要的功能，即宿主的天然免疫反应过程。高等脊椎动物不象低等脊椎动物，后者组织损坏后还能重构，而前者快速修复形成纤维化的疤痕。无论是创伤、微生物感染或外来物质造成的损伤，均会以时间重叠的方式发生一系列事件，包括凝结、炎症、上皮再生、形成肉芽组织、基质和组织重塑等。修复过程主要由分子信号，主要是细胞因子相互作用介导，这种作用可激活和调节细胞活性增加多倍，说明炎症和愈合的重要性。受伤后的反应经常通过构建皮肤模型来研究(1)，大多数组织损伤后发生的细胞事件以及介导因子的瞬时调节模式都和皮肤相似。损伤初期引发凝结，随后是局部的急性炎症反应，接着间叶细胞富集、增殖，基质合成。炎症处理不当将导致慢性而非愈合性的伤口，不可控制的基质累积(经常包含各种细胞因子通路)导致额外的疤痕和纤维化的后遗症。在鉴别细胞因子的功能方面的不断进步，为探索通过抑制/增强细胞因子来控制或调节病理修复提供了可能性。

胚胎伤口的无疤痕快速愈合

伤口愈合是一个动态的相互的过程，过程中涉及到可溶性介质、血细胞、细胞间质和实质细胞。伤口愈合过程所包括的三个阶段--炎症、组织形成和组织重塑--部分在时间上有重叠(1，2)。在胚胎皮肤形成阶段，单细胞繁殖形成基底层后产生的角质细胞，经生长停滞期后，在分化程序的严格控制下向上迁移成为形态学究全不同的表皮层。使用类似的程序，表皮在有机体的整个生命过程中不断更新。表皮形成后，成年哺乳动物皮肤也有快速修复损伤的能力。然而，如果追求快速促进伤口愈合和防止感染，则会导致伤口愈合不完美，常伴有表皮层和真皮层的伤疤出现。

相对于成年人的皮肤伤口修复，妊娠早期哺乳胎儿的伤口是通过再生过程修复的，其真皮和表皮能够进行完美的无伤疤重建(1，2)。以下几个是显著的胎儿和成人伤口修复之间的差异：胎儿伤口修复得比较快，并且很少或者不出现炎症反应(3)，其细胞因子/生长因子表达谱不同，通常是较低的(4)。

TGF-β抗体可部分地减少疤痕数量

有大量证据表明伤口修复受细胞因子、生长因子及其它们的受体等一系列因子的调节(5-7)。它们能够通过一种复杂但有序的模式影响细胞的迁移、生长和增生，同时与嗜中性白细胞及巨噬细胞的浸润、血管生成、纤维素增生、基质沉积、伤疤形成和表皮再植等有关。在伤口修复过程中，除了血小板与巨噬细胞，成纤维细胞是细胞因子或生长因子的主要来源。早期妊娠胎儿皮肤伤口的无疤痕修复主要是特定的细胞因子或生长因子作用的结果。

这些因子中，涉及无疤痕愈合与产生疤痕的修复这两个过程之间相互转化的转化生长因子β(TGF-β)，已经得到广泛研究。由于历史原因而取名的生长因子，其主要功能是调控细胞增值和分化，刺激细胞外基质如胶原的合成。在正常无疤痕胎儿的伤口中外源添加TGF-β导致疤痕形成，同时还观察到类似于成年人的炎症反应。在成年鼠皮肤伤口使用TGF-β抗体中和后伤口部分地减少了疤痕的数量，验证了这种TGF-β的促纤维化特性。TGF-β刺激产生I型胶原，这是成年机体皮肤主要的胶原类型。另一方面，TGF-β中和抗体没有完全阻止成人皮肤疤痕形成，因而近期一些研究对最为主要的疤痕形成因子的TGF-β的功能提出了质疑(8-15)。