[发明专利]针对活化蛋白C的单克隆抗体

说明书

背景技术

本发明要求2007年10月26日提交的美国临时申请序列号No.60/983,092的优先权，其全部内容在此通过引用并入本文。

1.技术领域

本发明一般性地涉及抗体领域。更具体地，本发明描述了选择性针对活化蛋白C(activated protein，APC)的单克隆抗体和抗体片段的鉴定和用途。

2.相关领域的描述

血液凝固是由多种血液成分或因子的复杂相互作用组成的过程，其最终导致纤维蛋白凝集。一般地，参与凝血“级联”的血液成分是酶前体或酶原-无酶活性的蛋白质，其通过活化剂的作用转变为活性形式。血液凝固的调节很大程度上由活化蛋白C(APC)实现的促凝血因子(pro-coagulation factor)Va和VIIIa的蛋白水解失活通过酶作用完成(Esmon，1989)。

蛋白C是APC的前体，其为有力的天然抗凝血剂。蛋白C由与凝血调节蛋白(TM)复合的凝血酶所活化。内皮细胞蛋白C受体(EPCR)增强了所述活化。TM和EPCR可被炎性介质(例如肿瘤坏死因子)所下调，由Esmon(1999)综述。也已发现在一些形式的败血症休克特别是脑膜炎球菌血症中TM和EPCR减少。因为EPCR和TM在内皮上表达，所以不可能在不除去血管的情况下直接确定它们的功能的好坏。

APC通过蛋白水解性切割和下调促凝血因子(pro-coagulant factor)起到抗凝血剂作用。APC还具有作为抗凋亡剂、抗炎症分子和细胞保护剂的重要功能。可通过除去APC来治疗关键因子丧失(例如在血友病中缺乏因子VIII)导致止血失调的出血疾病，或者在外伤过程导致暂时性止血损伤的外伤患者中。但是，这样的治疗除了除去抗凝血活性之外，还可导致除去APC有益功能的不希望的有害后果。因此，希望有一种选择性靶向APC的抗凝血活性而同时保留所述分子的其它功能完好无损的治疗剂。

发明内容

已经开发并在本文中描述了治疗出血疾病的方法，其涉及使用识别活化蛋白C但是不识别未活化蛋白C的单克隆抗体。在这点上，本发明还提供了选择性结合和/或阻断活化蛋白C中蛋白水解活性位点的单克隆抗体。在某些实施方案中，这些抗体可抑制活化蛋白C的抗凝血活性，但是可不影响未活化蛋白C的任何活性。在某些实施方案中，这些抗体还可保留活化蛋白C的细胞保护作用。因此，本发明的方法还包括利用这些单克隆抗体进行治疗，其中希望选择性抑制活化蛋白C的抗凝血活性。

因此，本发明的某些一般方面涉及单克隆抗体，其中所述抗体结合并抑制活化蛋白C，但是不结合或抑制未活化蛋白C。例如，本发明的某些实施方案涉及单克隆抗体，其中所述抗体结合并抑制活化蛋白C的抗凝血活性，但是不结合或抑制未活化蛋白C的活化。在某些实施方案中，本发明的单克隆抗体是HAPC1573。结合并抑制活化蛋白C及其抗凝血活性的本发明抗体可以在体内和/或体外起作用。

本发明涉及其他单克隆抗体，例如抑制活化或未活化蛋白C与内皮细胞蛋白C受体(EPCR)或磷脂结合并抑制未活化蛋白C活化的抗体。在某些方面，此类抗体结合小鼠未活化蛋白C的Gla结构域。可以在体外或体内情形下利用这些抗体。

本发明的抗体可以例如是鼠抗体，本发明的抗体可以例如是人源化抗体。本发明的抗体可以包含在药物组合物中，其中所述药物组合物还包含可药用载体。本发明的抗体还可用于其中抗体与细胞在体外或体内接触的方法中。

本发明还涉及在对象中抑制活化蛋白C的抗凝血活性的方法，其包括向所述对象(例如哺乳动物，如人)施用有效量的本发明抗体。在涉及施用本发明抗体的本发明方法或任何其它方法中，在某些实施方案中，活化蛋白C的细胞保护作用可以不降低，或者可保持在正常水平内。

本发明还涉及在对象中抑制活化蛋白C的酰胺裂解活性的方法，其包括向所述对象施用有效量的本发明抗体。

本发明还涉及治疗需要凝血的对象的方法，其包括向所述对象施用有效量的本发明抗体。这些对象可患有例如血友病或出血。

本文还涉及治疗患有败血症的对象的方法，其包括施用有效量的本发明抗体。这些方法还可利用施用活化蛋白C。

本发明还涉及治疗患有血友病的对象的方法，其包括向所述对象施用有效量的本发明抗体。

本发明的抗体还可用于例如在对象中调节止血或者在对象中调节血栓形成的方法，其包括施用有效量的本发明抗体。这些方法还可利用施用活化蛋白C。