[发明专利]组合物和治疗性抗肿瘤疫苗

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2007年8月9日提交的美国临时专利申请60/954,917以及2007年8月8日提交的法国专利申请FR 0705767的优先权，这两件专利申请在此通过引用并入本文。

本发明涉及在宿主中诱导抗肿瘤目的的细胞毒性应答的组合物，还涉及含有该组合物的治疗性抗肿瘤疫苗。

针对肿瘤抗原的天然免疫应答相对无效，已经确定了多种使得肿瘤逃避抗肿瘤免疫应答的机制。常规疫苗方法产生的体液应答已被证明是不够的。

已经研究了产生基于抗原呈递细胞(APC)特别是基于树突细胞的细胞毒性应答的策略。其原理具体地为通过激活患者自身免疫防御来破坏癌细胞。

树突细胞是抗原呈递细胞(APC)，其在产生肿瘤细胞特异性细胞毒性效应器方面非常有效。它们能够吞噬凋亡细胞或来源于肿瘤细胞的凋亡小体，然后能够与MHC I类和II类分子联合将肿瘤抗原呈递至T淋巴细胞。因此，树突细胞能够启动特异性溶细胞性T淋巴细胞克隆的增殖和产生。在该反应结束时，如此分化的杀伤淋巴细胞离开淋巴区室，从而在生物体内循环并结合到肿瘤上。对肿瘤所表达抗原进行识别，随后诱导溶解信号，导致肿瘤细胞的破坏。

已经研究了一些靶向树突细胞的抗癌疫苗的策略(Eymard JC，Bernard J，Bull Cancer.2003，90(8-9)：734-43)。其中一些是基于对树突细胞进行体外操纵，另一些是基于体内激活树突细胞。在前一种情况中，将树突细胞从取自患者的血细胞中分离出来；对它们进行培养并使其成熟，“脉冲刺激”，即用肿瘤肽、肿瘤裂解物、凋亡肿瘤细胞或者提取自自体肿瘤的热休克蛋白进行离体激活，最后再注射进该患者体内。在第二种情况中，在将肽、蛋白、经辐照的肿瘤细胞或者包含靶向树突细胞的抗原性肽的病毒注射到患者体内之后进行树突细胞的激活。然而，所获得的细胞毒性应答很少伴随临床效果。树突细胞的活化成为其有效活化溶细胞性T淋巴细胞能力的条件。树突细胞的活化水平似乎是本疫苗策略中的关键点。

离体使用树突细胞以获得抗肿瘤疫苗带来了有关下列项的一些问题：树突细胞的成熟状态，待注射细胞的数目，产生能够迁移到二级淋巴器官并诱导有效细胞毒性T应答之树突细胞的注射的途径、部位和频率(Banchereau J，Schuler-Thurner B，Palucka AK，Schuler G.[Dendriticcells as vectors for therapy]Cell.2001，10，106(3)：271-4.)。

树突细胞在体内的活化部分地受到以下限制：肿瘤抗原的弱免疫原性能力以及以充足的水平活化树突细胞的难度。

在数个出版物中已有设想使用红细胞作为载体来运输抗原并递送给APC的用途，其中抗原被包封到红细胞中或者结合到其表面上。已经在体内和体外研究了引发的免疫应答。

Hamidi等人最近描述了将BSA(牛血清白蛋白)作为抗原模型包封到人红细胞中(Hamidi M等人.，Drug Deliv.，2007；14(5)：295-300以及lntJ Pharm.，2007，29，338(1-2)：70-8)。作者建议将红细胞用作载体来将抗原呈递到网状内皮系统(RES)的APC中。在Hamidi等人发表的另一篇综述(J.Control.Release，2007，118(2)：145-60)中，作者指出已经研究了数种策略以促进靶向RES，所述靶向是由红细胞的衰老促进的，导致它们被摄取从而被裂解。还提到了其它途径，例如使红细胞暴露于稳定剂(特别是交联剂)，用抗RH抗体包裹红细胞，用IgG类型的抗体靶向脾脏或者用IgM类型的抗体靶向肝脏，热休克或者暴露于氧化剂、酶或抗生素。

在用装载抗原的红细胞免疫后可在体内获得体液免疫应答。由Murray等人进行的研究使得可在小鼠中静脉内注射装载了下列四种抗原之一的小鼠红细胞之后检测IgG免疫球蛋白：KLH(钥孔帽贝血蓝蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)、CTB(霍乱毒素b亚基)以及ADA(牛腺苷脱氨酶)。检测到在Th2应答期间主要的免疫球蛋白同种型IgG1和IgG3以及Th1应答标志物IgG2免疫球蛋白同种型，表明涉及两种类型的免疫应答，即体液应答和细胞应答(Murray AM et al.，Vaccine.，200628，24(35-36)：6129-39)。