[发明专利]凝血因子抑制剂

说明书

发明领域

本发明涉及参与凝血级联系统的蛋白酶的新抑制剂，制备它们的方法，和所述抑制剂作为凝血因子例如丝氨酸蛋白酶和维生素K-依赖性多肽的稳定剂、作为凝血因子的添加剂或凝血因子的制剂助剂的用途。尤其是，本发明涉及使因子VIIa(Factor VIIa)或其它因子VII(Factor VII)多肽针对化学和/或物理降解保持稳定，尤其是在其含水液体组合物中。

发明背景

丝氨酸蛋白酶因子VII(FVII)是参与血液凝固过程的血浆糖蛋白。FVII主要以单链酶原形式存在于血浆中，并且被另一种蛋白酶(FXa)断裂，得到它的双链活化形式FVIIa。

组织因子/因子VIIa(TF/FVIIa)复合物是血栓形成状况的主要引发剂。这种复合物是血液凝固的外在途径的一部分，并且介导因子IX和X的活化，最终导致凝血酶的产生。

已经证明，因子VIIa是有价值的治疗剂，可以用于治疗血友病和出血。人们需要适合于储藏和递送的因子VIIa的给药形式。理想地，可以以液剂形式保存和给予药物产品。或者，将药物产品冷冻干燥，即冻干，然后在患者使用之前通过加入合适稀释剂进行重组。需要药物产品具有足够的稳定性，以便能够长期保存，例如，保存6个月以上。

决定是否以液剂或冻干形式保持最终药物产品通常取决于那些形式的蛋白药物的稳定性。蛋白稳定性尤其可以受到例如凝血因子的离子强度、pH值、温度、冷冻/解冻的重复周期和接触剪切力等因素的影响。由于物理不稳定性，例如变性和/或聚集(溶解和不能溶解的团集体形成)，以及化学不稳定性，包括例如，针对水解、脱酰胺和/或氧化的不稳定性(仅举数例)，可能损失活性蛋白。此外，在因子VIIa(其是丝氨酸蛋白酶)的情况下，可能出现由于自催化造成的断裂(自身蛋白质水解；酶催的、自催化的降解)。对于蛋白药物的稳定性的综述，参见，例如Manning，等人，Pharmaceutical Research 6：903-918(1989)。

尽管可能出现蛋白不稳定性得到了广泛的理解，但对于具体蛋白通常很难预计具体不稳定性问题。任何这些不稳定性可能导致具有降低活性、增高毒性和/或增高免疫原性的蛋白副产品或衍生物的形成。实际上，蛋白沉淀可以导致血栓、剂型和数量的不均匀性以及堵塞注射器。此外，后转录的修饰作用，例如在N-末端的某些谷氨酸残基的γ羧化和添加碳水化合物侧链，能够提供对储藏时的改性敏感的潜在位点。

由此，蛋白的任何组合物的安全性和效果直接与它的稳定性相关。与保持冷冻干燥形式的稳定性相比，保持液态的稳定性通常是不同的工作，这是由于高度增加了分子运动的可能性，并由此提高了分子间相互作用的机率。与上述相比，保持浓缩形式的稳定性也是不同的工作，这是由于蛋白浓度增加会造成团集体形成的倾向。因子VIIa通过一些途径进行降解，尤其是聚集(二聚/低聚)、氧化和自溶性裂解(肽骨架的剪除或“重链降解”)。此外，可能出现沉淀。

通过从蛋白中除去水，可以显著地减缓许多这些过程。然而，对于因子VIIa来说，形成含水组合物具有消除重组偏差的优点，由此增加了给药精确性，以及简化了产品临床上的使用，由此增加了患者的依从性。理想地，因子VIIa的组合物在很宽的蛋白浓度范围内应该稳定6个月以上。这可以使给药方法更具灵活性。通常，更高浓度形式可以允许更低体积的给药，从患者角度来说，这是高度合乎需要的。与冻干产品相比，在给药的容易程度和使用方面，液体组合物可以具有许多优点。

当形成液体组合物时，可以考虑到许多因素。短期(即小于6个月)的液体稳定性通常在于避免显著(gross)的结构变化，例如变性和聚集。在文献中描述了许多蛋白的这些过程，并且存在许多稳定剂的例子。大家都知道，可有效稳定一种蛋白的试剂实际上使另一种蛋白不稳定。一旦蛋白针对显著(gross)结构变化保持稳定，形成具有长期稳定性(例如，大于6个月)的液体组合物在于进一步使蛋白针对该蛋白的具体降解类型保持稳定。降解的更多具体类型包括例如：二硫键杂乱，某些残基的氧化，脱酰胺化，环化。虽然并不总是可能精确定位个别降解物种，但还是进行了试验，从而检测微小变化，以便检测具体赋形剂使所研究蛋白保持稳定的独特能力。