[发明专利]用于检测耐药微生物的方法

权利要求书

1.一种用于在生物样品内检测耐药微生物的方法，包括：

扩增生物样品内存在的靶多核苷酸以生成扩增产物，其中所述靶多核苷酸与所述耐药微生物对万古霉素的耐药性相关，其中扩增包括至少一个循环步骤，其中循环步骤包括在合适条件下使所述生物样品与第一引物和第二引物接触以生成所述扩增产物，并且在合适条件下使所述扩增产物与探针接触，以使所述探针与所述扩增产物杂交，并且其中所述探针的T_M比所述第一引物和所述第二引物的T_M高至少8℃；以及

检测所述扩增产物，其中所述扩增产物的存在表明所述生物样品内存在耐药微生物。

2.一种用于在生物样品内检测耐药微生物的方法，包括：

扩增生物样品内存在的靶多核苷酸以生成扩增产物，其中使所述生物样品在合适条件下与第一vanA引物和第二vanA引物接触以生成扩增产物，其中所述第一引物包含与SEQ ID NO：1具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，并且所述第二引物包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，其中所述引物对扩增SEQ ID NO：7的核苷酸648-751；以及

检测所述扩增产物，其中所述扩增产物的存在表明所述生物样品内存在耐药微生物。

3.一种用于在生物样品内检测耐药微生物的方法，包括：

扩增生物样品内存在的靶多核苷酸以生成扩增产物，其中使所述生物样品在合适条件下与第一vanB引物和第二vanB引物接触以生成扩增产物，其中所述第一引物包含与SEQ ID NO：4具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，并且所述第二引物包含与SEQ ID NO：5具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，其中所述引物对扩增SEQ ID NO：8的核苷酸492-630；以及

检测所述扩增产物，其中所述扩增产物的存在表明所述生物样品内存在耐药微生物。

4.一种用于检测生物样品内不存在耐药微生物的方法，包括：

使生物样品与探针、第一引物和第二引物接触以形成混合物，其中所述引物能够扩增与微生物对万古霉素的耐药性相关的靶多核苷酸，其中所述探针将与所述靶多核苷酸杂交，并且其中所述探针的T_M比所述第一引物和所述第二引物的T_M高至少8℃；

如果所述生物样品内存在与耐药性相关的所述靶多核苷酸，则将所述混合物暴露于适于形成扩增产物的条件下；以及

检测不存在所述扩增产物，其中不存在所述扩增产物表明所述生物样品内不存在耐药微生物。

5.一种用于检测生物样品内不存在耐药微生物的方法，包括：

使生物样品与第一vanA引物和第二vanA引物接触以形成混合物，其中所述第一引物包含与SEQ ID NO：1具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，并且所述第二引物包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，其中所述引物对扩增SEQ ID NO：7的核苷酸648-751；

如果所述生物样品内存在vanA多核苷酸，则将所述混合物暴露于适于形成扩增产物的条件下；以及

检测不存在所述扩增产物，其中不存在所述扩增产物表明所述生物样品内不存在耐药微生物。

6.一种用于检测生物样品内不存在耐药微生物的方法，包括：

使生物样品与第一vanB引物和第二vanB引物接触以形成混合物，其中所述第一引物包含与SEQ ID NO：4具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，并且所述第二引物包含与SEQ ID NO：5具有至少约80％的同一性的核苷酸序列，其中所述引物对扩增SEQ ID NO：8的核苷酸492-630；

如果所述生物样品内存在vanA多核苷酸，则将所述混合物暴露于适于形成扩增产物的条件下；以及

检测不存在所述扩增产物，其中不存在所述扩增产物表明所述生物样品内不存在耐药微生物。

7.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的方法，其中所述微生物为肠球菌属(Enterococcus)的成员。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述肠球菌属的所述成员为粪肠球菌(E.faecalis)。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶多核苷酸为vanA多核苷酸。