[发明专利]用于肿瘤治疗的均质疫苗制剂的获得

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术，更特别地涉及人类健康领域。在一个实施例中，本发明描述了保护性和/或治疗性的癌症疫苗，特别是提供了疫苗组合物，其允许针对表皮生长因子(EGF)的免疫应答的显著增强。对于肿瘤(主要是上皮起源的肿瘤)的生长，EGF的肿瘤学相关性已被广泛证实。 

背景技术

EGF受体(EGFR)及其配体的系统是这样的分子复合物，其相互作用特异性地调节细胞生长并且显示出其对于上皮起源的肿瘤的不受控制的生长的影响。 

在肿瘤发生过程中，关于EGFR的活化的旁分泌和自分泌过程的失调牵涉生长因子的过表达以及其受体的合成增加和/或突变。 

EGF为53个氨基酸的多肽，其具有6045Da的表观分子量。该多肽由CohenS.(J.Biol.Chem.20(1962)237，1.555)首次分离和纯化。 

EGF是EGFR配体家族的成员；该家族包括在结构和功能上相关的蛋白质。该家族的其他成员为：转化生长因子(TGF)、双调蛋白(amphiregulin)(AR)、criptol(CR1)、肝素结合性生长因子、β细胞素(betacellulin)和表皮调节素(epiregulin)。另一方面，痘病毒家族包括与EGF相关的蛋白质，其中经最多表征的是痘苗病毒生长因子(VGF)。 

所有这些分子都能够结合并活化EGFR，因此它们被称为EGFR的配体并且在正常细胞和赘生性细胞的生长中或多或少地起作用。 

EGFR是大约170kDa的糖蛋白，其基因已经被克隆和测序。该受体的细胞内结构域与显示出与癌基因v-erb-B的产物的结构同源性的酪氨酸激酶活性相关，所述癌基因v-erb-B的产物牵涉恶性转化过程(Heldin C.H.(1984)，Cell 37，9-20)。 

近年来所积累的关于EGFR/EGFR配体系统与癌症之间的关系的所有证据使其成为用于癌症的免疫疗法的颇具吸引力的靶标。 

先前的结果已证明了用基于EGF的疫苗进行癌症的主动免疫疗法的可能性。事实上，已经获得了关于用与载体蛋白相连接的hrEGF进行疫苗接种而引起的免疫原性和低毒性的临床前和临床证据(González等人，(1996)，VaccineResearch 5(4)，233-243)。 

EP 0657175描述了包含与载体蛋白相偶联的自身EGF的疫苗组合物，所述复合物通过自身免疫效应来抑制依赖于EGF的肿瘤的生长。 

EP 0657175中所描述的疫苗组合物是缀合疫苗，其包含与载体蛋白(rP64k蛋白，霍乱毒素B链，破伤风类毒素蛋白和/或单克隆抗体)相偶联的EGF，并因此获得缀合物种类的异质的且低重复性的混合物。 

本发明所描述的新型疫苗制剂包含作为活性成分的自身EGF，其特征在于具有均一的化学组分、确定的纯度、强有力的免疫原性、大幅提高的临床活性，并且使得能够显著减少为了达到治疗作用所需的免疫接种次数。 

在本发明的疫苗制剂中自身抗原含量的降低令人惊讶地没有减少而是引起人体中抗EGF抗体滴度的显著增加。疫苗组合物中EGF及其衍生物的含量的降低是通过开发出通过膜的纯化方法而获得的，这也是本发明的组成部分之一。 

此外，本发明提供了均质的且可重复的疫苗制剂，其使得能够通过减少免疫接种次数而提高临床效果，这相比于先前所描述的疫苗组合物而言在癌症治疗方面和对于患者来说提供了巨大的好处。本发明的疫苗组合物可以包含合适的佐剂，例如氢氧化铝或Montanide。 

在另一方面，本发明涉及用于获得疫苗制剂的符合卫生的方法，所述疫苗制剂适合于通过肠胃外途径施用给患者。所述方法包括用于将hrEGF与载体蛋白rP64k共价缀合的适宜的程序，以及使用50-100kDa的范围内的超滤膜来进行纯化以去除在生物学上无活性(缺乏免疫原性活性)的缀合物种类和其他化学杂质。 

发明详述 

本发明提高了基于自身EGF的新型疫苗制剂，其特征在于具有均一的化学组分和确定的纯度、强有力的免疫原性、以及大幅提高的临床活性。此外，在本发明中所描述的疫苗呈递提高了当需要提高治疗剂量时显著减少患者所需的施用次数的可能性，这是因为该疫苗组合物是通过使得能够达到缀合物种类hrEGF-rP64k的各种不同浓度/毫升(称为效价)的方法而获得的。